氯乙烯对大鼠肝细胞周期及G₁/S关卡相关基因mRNA表达的影响

【作者】 马宁； 张盼红； 张文平； 高怡； 田凤洁； 吕懿； 仇玉兰；

【机构】 山西医科大学公共卫生学院卫生毒理教研室；

【摘要】 目的观察氯乙烯（VCM）染毒大鼠肝细胞周期不同时相的分布及细胞周期G₁/S关卡相关基因mRNA表达的变化,从周期调控的角度,探讨VCM可能的致癌机制。方法选用健康清洁级SD大鼠64只,按体重随机分为阴性对照组,VCM 5,25和125 mg·kg^-1染毒组。隔日腹腔注射染毒,连续12周。分别在染毒6周、12周处死动物。用流式细胞仪（FCM）分析肝细胞周期分布的情况;实时荧光定量PCR方法测定细胞周期G₁/S关卡的正性调控相关基因细胞周期蛋白A2（cyclinA2/CCNA2）、细胞周期蛋白D1（cyclinD1/CCND1）、细胞周期蛋白E1（cyclinE1/CCNE1）、细胞周期蛋白依赖性激酶2（CDK2）、细胞周期蛋白依赖性激酶4（CDK4）和负性调控相关基因p53（TP53）、p21（CDKN1A）、p16（CDKN2A）mRNA的表达。结果细胞周期分布结果显示,染毒6周,5和25 mg·kg^-1VCM染毒组大鼠肝细胞G₀/G₁期分布百分比分别为（69.73±10.94）和（74.32±9.29）,均高于对照组（56.13±10.65）,差异均有统计学意义（P<0.05）;25 mg·kg^-1VCM染毒组S期分布百分比（1.80±2.11）低于对照组（12.82±5.85）,差异有统计学意义（P<0.05）。染毒12周,各染毒组大鼠肝细胞G₀/G₁期分布百分比与对照组相比差异无统计学意义（P>0.05）;VCM 125 mg·kg^-1染毒组肝细胞S期分布百分比（14.91±4.43）高于对照组（6.68±2.64）,差异有统计学意义（P<0.05）。染毒6周,VCM染毒组肝细胞CCND1,CDK4和CDK2基因mRNA的表达均低于对照组,且VCM 125 mg·kg^-1染毒组与对照组比较,差异有统计学意义（P<0.05）。肝细胞TP53,CDKN1A,CDKN2A,CCNA2和CCNE1基因mRNA的表达没有明显的改变,差异无统计学意义（P>0.05）。染毒12周,肝细胞CDKN1A基因mRNA表达随着染毒剂量的增加有升高的趋势,VCM125 mg·kg^-1染毒组与对照组比较,差异有统计学意义（P<0.05）。肝细胞TP53,CDKN2A,CCNA2,CCND1,CCNE1,CDK2和CDK4基因mRNA的表达没有明显的改变,差异无统计学意义（P>0.05）。结论 VCM诱导大鼠肝细胞周期阻滞,早期阻滞于G₀/G₁期,晚期阻滞于S期。VCM对G₁期的阻滞主要是通过下调CCND1,CDK4以及CDK2基因的表达。更多还原