黄连解毒汤对感染大肠埃希菌大鼠脑组织TLR9表达的影响

【作者】 刘晓强； 周宏超； 俞亚玲； 赵守中； 杨鸣琦； 李引乾；

【机构】 西北农林科技大学动物医学院；

【摘要】 【目的】Toll样受体(Toll-like Receptors,TLRs)是近年来备受关注的一种模式识别受体(pattem recognition receptor,PRR),主要在免疫效应细胞如巨噬细胞、树突状细胞(dendritic cells,DC)和B细胞中表达,能够识别病原相关分子模式(pathogen associated molecular patterns,PAMP),从而启动天然和获得性免疫应答反应。其中,TLR9特异性识别存在于细菌和病毒中的核酸序列,是哺乳动物细胞识别细DNA中CpG模体的主要受体,为了探讨(TLR9)及相关炎症因子在脑损伤中的调节机制,本研究采用免疫组织化学SP法对正常大鼠、感染大肠埃希菌大鼠和黄连解毒汤预防大鼠脑组织中的TLR9表达及相关因子的动态变化进行了研究。【方法】66只SD大鼠随机分成3组。试验组(n=30):与其他组同步饲养,处理当天分别腹腔注射大肠埃希菌菌液0.5 mL/只(2.4×10~9CFU/mL),每组5只。黄连解毒汤预防组(n=30):与其他组同步饲养,每只按12.6 ml/kg剂量提前6d灌服黄连解毒汤,处理当天分别腹腔注射大肠埃希菌菌液0.5 mL/只(2.4×10~9CFU/mL),每组5只。对照组(n=6):与其他组同步饲养,处理当天腹腔注射等量生理盐水。分别于注射后的3、6、9、12、18、24 h随机处死一个攻毒小组和防治小组的大鼠及1只对照组大鼠,并取其大脑组织,用4%多聚甲醛固定。每个脑组织分为两部分:一部分脑组织常规石蜡包埋,HE染色,光学显微镜下观察病理变化;另一部分脑组织则进行常规免疫组织化学SP法,观察脑组织TLR9及相关因子的表达。TLR9以细胞质或细胞膜呈蓝色为阳性细胞。每张切片高倍镜(10×40倍)下随机选择5个不同的视野,图像信号采集与分析系统拍照,采用自带图像分析软件计数每个视野中阳性细胞数,取其平均值。利用SPSS17.0软件进行统计学分析。全部计量资料用X±S表示,两组资料比较采用t检验;以P<0.05为差异具有统计学意义性。【结果】TLR9在大鼠正常生理状态下有少量表达,感染大肠埃希菌后,TLR9的表达出现明显变化,且这种变化随着时间的推移而越发明显。在感染后3h时TLR9表达量较正常生理状态下显著增加,在6h时开始显著增加,12h时达到高峰,与对照组和试验组相比,有极显著差异(P<0.01)。预防组与对照组比较无统计学意义(P>0.05)。该研究结果显示黄连解毒汤可通过抑制TLR9的表达对细菌所致的脑损伤产生保护作用。【结论】TLR9参与了脑组织抵抗消灭外来病原的过程,是脑组织先天性免疫和与获得性免疫间转化的重要因素。更多还原