钙稳态失衡在黏菌素致鸡脑神经元线粒体损伤中的作用

【作者】 代重山； 张德显； 佟恒敏； 马晶； 李继昌；

【机构】 东北农业大学动物医学学院； 沈阳农业大学动物医学学院； 东北农业大学校医院；

【摘要】 【目的】探讨黏菌素对鸡神经元线粒体的损伤机制,为研发其神经毒性保护剂提供理论基础。【方法】以体外培养的鸡脑神经元为研究对象,在含黏菌素0、0.83、4.15、8.3μg·mL^-1的DMEM培养液中培养24 h后,应用MTT法及LDH释放量法检测黏菌素对神经元活性的影响,透射电镜和流式细胞仪检测线粒体损伤及线粒体膜电位（△Ψm）的变化,以Fura-2/AM检测细胞内[Ca2+]i的变化,RT-PCR法检测黏菌素对细胞CaMmRNA表达的影响。【结果】与对照组相比,在黏菌素0.83、4.15、8.3μg·mL^-1的DMEM培养液中培养24 h后,细胞成活率下降,分别下降至（95.53±6.49）、（85.22±5.81）（P<0.01）、64.77±4.29%（P<0.01）:LDH释放量增加,分别增加了（5.2±1.0）、（70.1±9.6）（P<0.01）、（95.7±9.3%）（P<0.01）;细胞内[Ca2+]i增加,分别增加了（25.2±18.2）、（181.1±29.6）（P<0.01）、（344±19.3%）（P<0.01）;透射电镜观察发现,4.15μg·mL^-1黏菌素剂量组大部分线粒体脊结构缺失,甚至空泡化;至4.15μg·mL^-1黏菌素剂量组几乎所有线粒体脊结构缺失,空泡化;△Ψm呈降低趋势,PI/Rh123区的细胞百分率分别增加至（4.92±0.93）、（14.57±3.41）（P<0.01）、（28.74±6.31）（P<0.01）%;RT-PCR检测结果显示,与对照组（1.00±0.24）相比,CaMmRNA相对表达量呈降低趋势,分别为（1.03±0.15）、（0.76±0.21）（P<0.05）、（0.63±0.27）（P<0.01）。【结论】黏菌素通过升高细胞内[Ca2+]i,诱导线粒体通透性性形成,降低线粒体△Ψm,从而造成神经元线粒体损伤。另一方面,由于[Ca2+]i升高,Ca2+/CaM复合物形成,至CaMmRNA表达的降低。钙稳态失衡是黏菌素致鸡神经毒性机制之一。更多还原