镉对PP2A-B56γ高表达的人肝L02细胞中基因转录和细胞毒性的影响

【作者】 罗洁； 林育纯； 陈慧峰； 李文； 李晓杰； 张树江； 林丽娜； 胡耀明； 郝元涛； 陈雯； 凌文华； 林忠宁；

【机构】 中山大学公共卫生学院；

【摘要】 目的:为探讨重金属镉对肝细胞的毒性损伤及其去磷酸化作用机制,观察肝细胞内蛋白磷酸酶2A(PP2A)-B56γ亚基高表达对镉诱导细胞毒性和相关基因转录水平的影响。材料和方法:采用PPP2R5C基因稳定转染永生化人正常肝L02细胞建立的PP2A-B56γ高表达L02-2R5Cc细胞,以L02-pB为空载体对照细胞:3因素2水平设计,给予CdCl2单独染毒(Cd组)或肿瘤坏死因子-α(TNF-α)预处理后CdCl2染毒(TNFα+Cd组),6h时提取总RNA,qPCR检测细胞内PPP2R5C和金属硫蛋白1B(MT1B)基因mRNA转录水平,24h和36h时MTT法检测细胞增殖功能和活力,48h时单细胞凝胶电泳(SCGE)检测细胞DNA双链断裂(DSBs)。结果:镉处理、TNF-α预处理和不同细胞3个因素的主效应均有统计学意义(P<0.05),而且在不同细胞与镉处理、和与TNF-α预处理之间均存在交互效应,表现为镉处理和TNF-α预处理均能使L02-2R5Cc细胞中PPP2R5C总mRNA和外源性导入的PPP2R5C-FLAG融合片段mRNA明显增高(P<0.05);但是MT1B mRNA在镉处理组显著增高、在TNF-α预处理组明显降低(P<0.05)。TNFα+Cd组与单独Cd组比较,则使L02-2R5Cc细胞中PPP2R5C mRNA进一步升高、但MT1B mRNA相比却降低。与此对应地,Cd组细胞增殖活力抑制在L02-2R5Cc细胞低于L02-pB细胞(P<0.05);L02-2R5Cc细胞SCGE的尾长和尾矩在Cd组较对照组增高(P<0.05),而且在TNFα+Cd组细胞增高更为明显(P<0.05)。结论:结果表明PP2A-B56γ高表达降低了镉诱导的肝细胞毒性,而炎症因子可增强镉对PP2A-B56γ高表达肝细胞DNA的损伤,提示PP2A介导的去磷酸化调控机制参与了对细胞转归的作用。更多还原