核因子-κB信号干预对PP2A-Aα基因启动子区多态性单体型转录活性的影响

【作者】 林育纯； 陈慧峰； 林丽娜； 罗洁； 李文； 张树江； 林忠宁； 陈雯；

【机构】 中山大学公共卫生学院；

【摘要】 目的:蛋白磷酸酶2A(PP2A)参与致癌过程中细胞内信号途径的调控;我们已有研究筛查了PP2A-Aα亚基基因(PPP2R1A)启动子区(5’-侧翼端-1801 nt～+244nt)潜在的功能多态性位点,而且发现倍半萜烯内酯化合物(SLs)可经由细胞内核因子-κB(NF-κB)信号通路影响人鼻咽癌细胞转归。本课题拟获得肿瘤细胞内NF-κB信号干预直接影响PPP2R1A转录功能活性的证据,以探讨该基因启动子区多态性与NF-κB信号调控的相互关系。材料与方法:采用已建立的PPP2R1A近端启动子区(-448nt～+244nt)报告基因重组质粒,与pRL-TK共转染人鼻咽癌CNE1细胞株;以TNF-α为细胞内NF-κB信号活化诱导因子建立模型;采用小白菊内酯(parthenolide,PN)作为干预作用受试物:进行双荧光素酶报告基因检测,分析RLU表示启动子转录功能活性。结果:测序该重组质粒pGL3b-2R1Ap-S3的多态性单体型为-241(4G)/+87C/+107(9C)/+108G;In Silicon分析表明在-238 nt～247nt存在潜在的NF-κB转录因子结合位点,而-241G插入/-(4G/5G)多态性位点位于该转录因子结合区。与pGL3b空载体比较,pS3转染(pS3组)呈明显高RLU(286.57±30.85)(P<0.01),提示该目的片段区域具有高启动子转录活性:进而pS3转染给予TNF-α(10ng/μl)诱导(pS3+TNFα组)的RLU为370.21±28.16,显著高于pS3组,提示TNF-α可诱导启动子转录活性,表明NF-κB信号活化参与了该基因目的片段区域的启动子转录调控;然而,pS3转染后给予PN(10μM)预处理(pS3+PN+TNFα组)的RLU为253.02±4.49,显著低于TNF-α诱导增高的RLU(P<0.05),而与pS3转染后给予NF-κB信号活化抑制剂PDTC(25μM)预处理的阳性对照组(pS3+PDTC+TNFα组)的RLU(269.89+20.65)差异无统计学意义(P>0.05);提示PN可通过抑制TNF-α诱导的NF-κB信号活化下调PPP2R1A基因启动子转录活性。结论:PP2A核心酶Aα亚基基因启动子区潜在的功能多态性位点可影响倍半萜烯内酯化合物介导的肿瘤细胞内NF-κB信号调控和目的基因转录活性;NF-κB信号参与了PPP2R1A基因启动子区多态性对转录的调控作用。更多还原