几丁质对过氧化氢致人胚肺成纤维细胞氧化损伤的影响

【作者】 谭玉凤； 吴南翔； 高明； 金锋； 陶核； 金勇； 刘克澄；

【机构】 浙江省医学科学院；

【摘要】 目的研究几丁质(chitin)对人胚肺成纤维细胞内活性氧生成的影响,以探讨几丁质对于细胞氧化损伤是否有拮抗作用。方法采用细胞染毒方法,0μmol/L、25μmol/ L、50μmol/L几丁质分别加入正常细胞中孵育2小时,再加入800 nmoL/L过氧化氢对细胞染毒1小时,同时设阳性对照(维生素C50μmol/L,24h刺激)和阴性对照(PBS,24h刺激),每组设3个复孔。检测前加入荧光探针DCFH-DA (10μmol/L)孵育1小时后以无血清细胞培养液洗涤细胞3次,以充分去除未进入细胞内的DCFH-DA,利用激光共聚焦显微镜(Zeiss LSM-710)在×20倍、1.2数值孔径、488nm和523nm激发波长的条件下观察活性氧(ROS)在各剂量组的生成情况,计算相对荧光强度并做时间序列。结果:阴性对照组细胞排列正常,细胞膜、细胞核轮廓清晰,各剂量组和阳性对照组细胞排列有不同程度的混乱。加入过氧化氢后阳性对照组和各剂量组从0s开始相对荧光强度开始升高,到110s后各组相对荧光强度均开始下降,与0μmol/L几丁质组相比,阳性对照组、25μmol/L和50μmol/L几丁质组的相对荧光强度显著降低(P>0.05),观察至367s时相对荧光强度分别为阴性对照1.00±0.1、阳性对照0.65±0.05、0μmol/L几丁质组1.18±0.2,25μmol/L几丁质组0.56±0. 03,50μmol/L几丁质组0.63±0.04。结论几丁质能有效减少活性氧的生成,具有与维生素C类似的抗氧化作用。更多还原