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重组人p66Shc/腺病毒表达载体的构建与表达
【机构】 北京协和医学院,中国医学科学院生物医学工程研究所,天津市生物医学材料重点实验室；
【摘要】 <正>目的p66Shc是调节氧化应激下凋亡应答和衰老信号转导途径的重要蛋白分子,可通过引起线粒体中活性氧自由基产生导致细胞氧化损伤。对p66Shc功能的研究多通过基因突变或敲除降低p66Shc的表达水平来观察低水平表达p66Shc对机体的保护作用,而对于提高细胞内的p66Shc表达水平,仅利用现有的pcDNA3.1-p66质粒进行了细胞系的研究,这对于原代细胞及在体动物的研究受到很大限制。笔者利用Clontech公司最新的腺病毒重组技术构建人p66Shc/腺病毒表达载体,观察其在脐静脉内皮细胞中的表达。方法扩增pcDNA3.1his p66Shc质粒中的p66Shc与腺病毒骨架载体进行体外重组连接,将重组质粒转化进感受态细胞(E.coli HST08 strain),利用氨苄青霉素抗性与菌落PCR法筛选重组体质粒pAdenoX-p66Shc,经测序确认。重组体质粒经PacⅠ酶切线性化后转染进腺病毒包装细胞系HEK293A,10 d后收集细胞裂解液感
- 【会议录名称】 天津市生物医学工程学会第三十三届学术年会论文集
- 【会议名称】天津市生物医学工程学会第三十三届学术年会
- 【会议时间】2013-04-01
- 【会议地点】中国天津
- 【分类号】R346
- 【主办单位】天津市生物医学工程学会、天津市第三中心医院