不同培养体系对鼠表皮干细胞增殖、分化的影响

【作者】 李孝建； 沈雁； 张志； 曾耀英； 李延仓； 杨小红；

【机构】 暨南大学附属广州市红十字会医院烧伤科； 暨南大学生命科学院组织移植与免疫中心；

【摘要】 目的:探讨不同培养体系对表皮干细胞增殖、分化的影响,建立理想的调控表皮干细胞增殖、分化的培养体系。方法:酶消化和Ⅳ型胶原快速粘附法获取鼠表皮干细胞,分别在普通培养皿、与几丁质膜生物支架材料及以几丁质膜材料作为载体植入裸鼠体内等不同培养体系下培养,观察表皮干细胞生长情况;普通培养和几丁质膜共培养4w后,表皮干细胞克隆形成率的差异;免疫组织化学染色观察表皮干细胞以几丁质膜为载体植入裸鼠体内后4w,表皮干细胞的增殖、分化情况等。结果:表皮干细胞在普通培养皿培养3d左右,细胞开始克隆增殖,12d左右融合成片,传代培养后增殖能力逐渐减低,融合成片时间逐渐延长,传代培养3-4代后细胞终末分化,失去增殖能力;几丁质膜培养表皮干细胞,2w后呈棋盘式集落生长,4w后几丁质膜上有大量的表皮干细胞小集落,集落上有大量的增殖细胞附着生长,扫描电镜下见几丁质膜纤维直径约10μm,以纤维为主,上下两层呈纵横排列成十字孔,孔间有大量表皮干细胞集落。几丁质膜支架材料培养表皮干细胞4w后,其克隆形成率明显高于普通培养皿培养(P<0.05)。表皮干细胞几丁质膜支架植入裸体内培养4w后,细胞大量增殖形成"巢状"排列,在"表皮巢"周围,可见皮肤附件结构形成。结论:表皮干细胞在体外普通培养皿培养,可增殖生长,但维持增殖时间较短;与几丁质膜材料培养,可较长时间地维持表皮干细胞的增殖特性;植入体内后表皮干细胞大量增殖,并可分化形成毛囊等皮肤附件结构。更多还原