稀土镧化合物抑制TNF-α活化NF-κB信号通路

【作者】 郭菲； 汪泱； 李国辉；

【机构】 南昌大学第一附属医院烧伤科； 南昌大学第一附属医院泌尿外科研究所；

【摘要】 目的:观察氯化镧对NF-κB信号通路中关键分子的蛋白表达和磷酸化及NF-κB/p65亚基与靶基因结合能力的影响,探索氯化镧抑制NF-κB活化的可能作用位点。方法:以1×10⁶个/ml接种细胞于含10%胎牛血清的RMPI 1640液体培养基中,于5%CO₂、37℃恒温培养,随机分组如下:①TNF-α组:以含TNF-α20ng/ml的无血清培养基培养Hela细胞。②氯化镧+TNF-α组:分别以含氯化镧5,25,50和100μmol/L的培养基培养Hela细胞4h后弃培养基并以无热原生理盐水漂洗细胞三遍,再加入含TNF-α20 ng/ml的培养基继续培养。③空白对照组:培养基为不含血清,不加氯化镧和TNF-α。④氯化镧对照组:以含氯化镧100μmol/L的培养基培养Hela细胞。各组细胞根据检测方法的要求分别培养于24孔培养板或培养瓶中,于30min后,收集培养上清、细胞待检。运用Western blot技术测定胞浆提取物中IκBα蛋白表达和磷酸化水平及胞核提取物中NF-κB/p65蛋白表达水平;最后用Transcription FactorAssay kit试剂盒测定胞核提取物中p65蛋白与DNA靶序列结合能力。结果:（1）氯化镧对TNF-α诱导的IκBα磷酸化和降解的抑制作用:TNF-α能够诱导Hela细胞中IκBα的磷酸化和降解。随着氯化镧处理的浓度不断升高,IκBα表达水平逐步升高,而磷酸化水平不断降低。表明氯化镧能够抑制TNF-α诱导的IκBα的磷酸化和表达水平的降低,且该效应随着氯化镧浓度的升高而逐步增强。（2）氯化镧对TNF-α诱导的NF-κB活化的抑制作用:25-100μmol/L氯化镧能够显著抑制TNF-α诱导胞核NF-κB/p65蛋白表达水平,5-100μmol/L氯化镧还能显著减弱Hela细胞中NF-κB/p65与靶DNA结合活性,上述抑制效应呈剂量依赖关系。结论:NF-κB的激活剂TNF-α通过磷酸化IκBα,导致IκBα降解,使NF-κB/p65转位入核与靶基因启动子结合,以启动相关基因的表达;氯化镧通过阻断TNF-α诱导IκBα磷酸化,抑制IκBα的降解和NF-κB/p65转位入核并阻断NF-κB/p65与靶基因的结合。更多还原