化学分子伴侣对重组oIFN-tau在大肠杆菌中可溶性表达的影响

【作者】 徐晓健； 宋长征； 吕丽燕；

【机构】 山东省医学科学院山东省医药生物技术研究中心,卫生部生物技术药物重点实验室； 山东省内分泌与代谢病研究所； 山东省医学科学院； 山东省医学科学院山东省肿瘤防治研究所；

【摘要】 背景绵羊IFN-tau(ovine interferon-tau,oIFN-tau)作为新型的Ⅰ型干扰素,是一种非糖基化蛋白,分子量约为20 kDa,等电点为5.2～5.5。成熟的IFN-tau是由172个氨基酸残基组成的低分子量酸性蛋白质,相对于IFN-a和β(166个氨基酸),在C-末端有6个氨基酸残基的延伸。它具有强的抗黄体溶解、抗病毒、免疫调节等生物学功能,特别是对反转录病毒抑制的高度特异性以及对自身免疫性疾病的免疫调节活性,除此之外IFN-tau在生物学功能方面有自身特点,它仅在胚胎滋养层细胞中表达,无需病毒诱导,更为突出的是高浓度IFN-tau表现出较其他Ⅰ型干扰素较小的细胞毒性。化学分子伴侣是一类能够在体外稳定蛋白结构的小分子化合物,包括有机溶剂二甲基亚砜、渗透物阿拉伯糖、葡萄糖以及氧化三甲胺等,在体外它已被广泛用于阻止蛋白的聚集及包涵体的形成。鉴于oIFN-tau的重要作用,为了深入研究其功能,我们首次探讨了化学分子伴侣对重组oIFN-tau在大肠杆菌中表达时可溶性的影响。目的探索化学分子伴侣对重组oIFN-tau(ovine interferon-tau)在大肠杆菌中可溶性表达的影响。方法以oIFN-tau cDNA为模板PCR法扩增oIFN-tau成熟肽基因后,扩增产物和pBV221表达载体分别用EcoRI和BamHI限制性内切酶双酶切、连接,构建表达载体,并进行双酶切和测序鉴定。用不同浓度的化学分子伴侣(甘油、葡萄糖、β-环糊精、蔗糖、D-甘露醇、二甲基亚枫、乙醇)于42℃诱导阳性重组菌表达4h,分别取E.coli上清和沉淀做SDS-PAGE分析。结果SDS-PAGE分析结果表明甘油、葡萄糖、β-环糊精、蔗糖、二甲基亚枫对oIFN-tau的表达形式没有影响;而D-甘露醇和乙醇增加了oIFN-tau的可溶性表达,并且存在浓度依赖性。结论化学分子伴侣D-甘露醇和乙醇促进了oIFN-tau的可溶性表达,为进一步的功能研究奠定了基础。更多还原