冷诱导RNA结合蛋白(CIRP)慢病毒过表达载体的构建及病毒包装与滴度测定

【作者】 李静辉； 孟宇； 贺军； 李云龙； 张雪； 杨焕民； 李玉恒； 计红； 李士泽；

【机构】 黑龙江八一农垦大学动物科技学院；

【摘要】 构建CIRP慢病毒过表达慢病毒载体,并对其进行病毒包装、鉴定与滴度测定。为进一步研究CIRP功能提供基础工具。本研究从4℃冷处理8h的SD大鼠睾丸组织中获得CIRP的c DNA序列测序后,将其克隆入LV5质粒中,经双酶切及测序鉴定;利用脂质体将鉴定的阳性重组LV5-CIRP表达载体、p Gag/Pol、p Rev、p VSV-G三个质粒共转染到HEK-293T细胞,72h收获上清,包装产生慢病毒。将所得病毒悬液梯度稀释后感染293T细胞,检测病毒滴度。经琼脂糖凝胶电泳鉴定、PCR鉴定、酶切及测序结果证明成功构建了LV5-CIRP重组质粒,序列比对与设计序列符合率100%,并成功的包装成慢病毒,病毒滴度为6.30×108TU/m L。本实验成功构建CIRP慢病毒表达载体并完成了慢病毒包装及滴度的测定,为今后的研究提供了基础工具。更多还原