生长激素受体MAb的抗原表位与生物学意义的探讨

【作者】 赵芳毓； 张雨； 万瑜；

【机构】 武汉大学基础医学院生理系； 武汉大学医学研究中心；

【摘要】 目的:MAb74.3、MAb18.24以及MAb263是一组识别生长激素受体(GHR)胞外域(ECD)的单克隆抗体(MAb)。以往的研究表明,MAb74.3和MAb18.24虽不影响GH与受体结合,但都能阻碍GH诱导GHR发生构象改变,从而抑制GHR信号转导,充当GHR的拮抗剂。MAb263也是被广泛用于不同组织GHR的定位与定量、同时也充当GHR激动剂的单克隆抗体。它们表现出不同的生物学意义,可能是由其所识别的抗原表位不同所决定的。方法:本研究通过表面等离子共振(SPR)技术,采用Biacore T200记录的共振单位(RU)作为结合响应值。首先将GHR-ECD固定于SA芯片表面(<100 RU),然后使MAb74.3、MAb18.24和MAb263以三种不同的排列顺序、饱和浓度(10ug/m L)、依次流过芯片表面(20ul/min),以观察相应的抗原表位被封闭后是否仍能对下一个抗体响应;结果:SPR分析显示,当GHR-ECD被MAb74.3完全封闭后,MAb18.24基本不能再与GHR-ECD结合(1.8RU),而MAb 263却能有效结合(44RU);三种不同的排列顺序均提示,MAb 74.3与18.24所识别的抗原表位有部分重叠,而MAb 263所识别的抗原表位与MAb 74.3和18.24则完全不重叠。进一步将GHR-ECD近膜段的受体二聚化结合区的201位丝氨酸突变后,MAb 74.3及MAb 18.24完全失去与GHR-ECD的结合能力,相反MAb 263的结合不受影响(55RU)。这提示MAb 74.3与MAb 18.24所识别的抗原决定簇位于S201所在的受体二聚区,正因为此,当它们与受体分子结合时,将直接封闭GHR-ECD发生二聚反应的氨基酸,阻碍GH诱导GHR二聚及发生相应的构象改变。结论:MAb 74.3及MAb 18.24的抗原决定簇位于GHR-ECD的二聚区,故阻碍GHR变构激活过程。MAb263所识别的抗原表位可能在远离受体二聚区的GH结合区,所以显示出拟GH效应。更多还原