H2S对AngiotensinⅡ引起的延髓神经元活性氧和钙离子水平升高的调控

【作者】 曹冬青； 刘小妮； 徐海艳； 陶然； 黄莺； 王睿； 卢宁；

【机构】 复旦大学基础医学院生理教研室；

【摘要】 目的:探讨内源性和外源性H2S对Ang Ⅱ引起的ROS及神经元胞内钙离子水平的影响以及其可能的作用机制。方法:原代培养延髓神经元;免疫荧光双标法鉴定神经元及胱硫醚-β-合成酶(CBS)的表达;同时或单独给予Ang Ⅱ(1μmol/L)和丁酸钠(Na Bu,CBS激动剂;100μmol/L、250μmol/L和500μmol/L),二氢乙啶荧光探针法测定ROS水平;总超氧化物歧化酶(SOD)活性检测试剂盒检测总SOD的活性;Fura-2/AM法记录神经元内内钙浓度的变化。结果:(1)原代培养的延髓神经元90%以上为谷氨酸能神经元;(2)荧光双标显示CBS在延髓神经元表达;(3)Ang Ⅱ(1μmol/L)抑制神经元总SOD的活性,升高神经元ROS水平;预先给予不同浓度的Na HS(外源性H2S)和Na Bu孵育神经元,再给予Ang Ⅱ,二者均能显著抑制Ang Ⅱ引起的ROS水平的升高,且具有剂量依赖性;(4)单独给予Ang Ⅱ引起神经元胞内游离钙水平升高,预先给予Na HS或Na Bu,再给予Ang Ⅱ,胞内游离钙减弱。(5)在检测神经元胞内游离钙水平的前提下,相同孵育时间内,单独给予Ang Ⅱ(5μmol/L)5min后ROS水平明显升高;给予Na HS(10μmol/L)3 min,再二次给予Ang Ⅱ(5μmol/L)5min,ROS水平显著降低。结论:外源性和内源性H2S通过调节SOD活性抑制Ang Ⅱ引起的延髓神经元ROS水平的升高;同时H2S可抑制Ang Ⅱ引起的神经元胞内钙离子水平升高,Ang Ⅱ引起的神经元胞内游离钙水平升高伴随ROS的增加。更多还原