日本七鳃鳗Prohibitin蛋白基因克隆以及系统进化分析

【作者】 陈操； 刘欣； 李庆伟；

【机构】 辽宁师范大学生命科学学院；

【摘要】 Prohibitin(phb)作为一种序列高度保守的蛋白广泛分布于多种生物细胞中,并被定位在多种细胞器上,广泛参与细胞增殖、分化、衰老、凋亡等多种生物学进程。并因其结构的保守性,功能的多样性,从而作为生物体基因功能研究的新热点。七鳃鳗是现存的最古老的脊椎动物之一,由于圆口纲中的另一物种盲鳗的胚胎难以获得,所以100多年来,七鳃鳗一直是研究无颌类脊椎动物进化和发育的唯一物种。作为原索动物进化至脊椎动物的过度物种,七鳃鳗更被看成是研究脊椎动物进化和发育的活化石。基因表达、免疫组化和序列分析等多种技术广泛用于七鳃鳗的研究工作中。本篇论文,以日本七鳃鳗(Lampetra japonica)为研究对象,通过对日本七鳃鳗血液cDNA文库有效的EST序列进行分析,以日本七鳃鳗血液总RNA为模板进行RT-PCR扩增,最终获得了全长的目的基因。通过同源序列搜索,在公共数据库中获得了24个相关物种完整的PHB基因序列。对这完整的24个不同物种PHB基因氨基酸序列进行系统进化分析,最终获得PHB基因在生物进化的过程中系统进化的模式图。利用RT-PCR技术,检测出除了血液外,PHB也在七鳃鳗的肝、心肾、等其他组织中表达,但其表达量不同,说明:PHB基因的表达可能是与七鳃鳗不同组织所具有的功能相关。把目的基因克隆至表达载体上,进行蛋白表达,最终获得蛋白。制备PHB蛋白多克隆抗体,利用多克隆抗体进行免疫组化。实验结果显示在七鳃鳗,肝、心等组织中PHB都存在分布,这一结果与RT-PCR所得结果一致。更多还原