日本七鳃鳗中可变淋巴受体VLR的抗体制备

【作者】 李默； 吴芬芳； 刘欣； 苏鹏； 宋德利； 李庆伟；

【机构】 辽宁师范大学生命科学学院；

【摘要】 以七鳃鳗为代表的无颌类脊椎动物,被普遍认为处在进化出适应性免疫系统的边缘。近年来,有证据表明在其体内发现了一种新型的可变受体,代替了有颌类脊椎动物中的免疫球蛋白型抗原受体,它是由基因组亮氨酸富集重复(leucine-rich repeat,LRR)单元组成不同的抗原受体编码的可变淋巴受体,称为可变淋巴受体(variable lymphocyte receptor,VLR)。因此,研究无颌类脊椎动物适应性免疫的机制,对揭示适应性免疫系统的起源与进化具有重要意义。在对七腮鳗研究过程中,我们为了得到VLR抗体以进行进一步确认VLR定位与起源以及其功能的检测,本实验进行了以下步骤:通过对VLR的序列分析,在七腮鳗的cDNA文库中搜索得到VLR的EST序列,经过比对和分析得到一段VLR的保守序列。然后进行VLR基因的克隆,得到VLR全长序列和保守序列,该基因含有900多个碱基编码300多个氨基酸;保守区含有约250个碱基,编码82个氨基酸。通过已知的VLR序列进行蛋白表达和纯化。最后,将纯化的VLR蛋白注入新西兰兔体内,进行免疫学实验,从而最终得到抗七腮鳗VLR兔的多克隆抗体。更多还原