CD9在日本七鳃鳗免疫中作用的初探

【作者】 苏鹏； 吴芬芳； 宋德利； 李默； 刘欣； 李庆伟；

【机构】 海洋生物功能基因与蛋白质组学研究所；

【摘要】 目的通过检测日本七鳃鳗中CD9的基因水平上免疫前后的变化,来初探CD9在日本七鳃鳗免疫中发挥的作用。制备抗CD9的抗体,为以后检测以及从蛋白水平上分析CD9在七鳃鳗中发挥的免疫学方面的作用打下良好的基础。方法设计CD9引物,利用反转录技术获得CD9的cDNA片段,插入PET-32a表达载体上,并将重组质粒转入RosettaBlue细胞中进行原核表达,得到CD9蛋白,并采用镍亲和层析的方法对CD9进行纯化,得到纯化的CD9蛋白;饲养新西兰兔,制备抗CD9的多克隆抗体;应用流式细胞仪来检测之前制备的抗CD9的抗体与亲本的抗原的结合情况;利用Real time PCR技术来检测CD9在七鳃鳗9种不同组织中的分布情况以及免疫前后其各组织中表达量的变化。结果成功构建出CD9的原核表达载体。首次成功制备出了兔抗七鳃鳗的高效价多克隆抗体。经过流式细胞仪的检测,之前所制备抗CD9抗体能够成功的识别亲本性抗原。Real time PCR的检测结果显示,在免疫后的CD9在不同组织中的含量均明显要高于免疫前的含量,其中心脏和卵子中的CD9表达差异性尤为的显著。结论CD9在七鳃鳗的免疫作用中扮演着其中一个重要的角色。更多还原