七带石斑鱼精子冷冻保存及应用

【作者】 田永胜； 齐文山； 汪娣； 翟介明； 陈超； 陈松林；

【机构】 中国水产科学研究院黄海水产研究所农业部海洋渔业可持续发展重点开放实验室； 上海海洋大学水产与生命学院； 青岛农业大学生命科学院；

【摘要】 七带石斑鱼是雌雄同体、雌性先熟鱼类,养殖群体中雄性数量少,利用人工方法促进其性别转化,同时进行精子冷冻保存技术研究,提高精子利用率,对于人工繁殖和杂交育种具有重要意义。本文利用在鱼体中注射17α-甲基睾酮缓释胶囊的方法,促使七带石斑鱼性别转化,采集成熟精液为实验材料,对精子稀释液、抗冻剂种类和适宜浓度、冷冻保存液进行了筛选,实验中精子与冷冻保存液以1:1比例稀释,用2ml冷冻管在液氮(-196℃)中冷冻保存精子,冷冻精子在37℃水浴中解冻。解冻后精子活力、快速运动时间和寿命利用显微镜观察统计。利用冷冻精子与云纹石斑鱼卵进行杂交受精,统计受精率和孵化率;并对适宜于精子激活海水盐度进行筛选。实验数据利用SPSS软件中单因素方差分析法(One-WayANOVA)和Student-Newman-Keuls进行比较分析。研究结果显示,利用60%葡萄糖、10%NaCl、0.5%NaHCO3配制而成的稀释液ES1-3稀释精液并冷冻,解冻后精子活力达58.33±7.64%,与新鲜精子活力66.67±5.77%无显著性差异(P>0.05),而且显著高于MPRS、TS-2和其它ES1系列液冷冻保存精子的活力(P<0.05)。利用ES1-3为基础液配制20%二甲基亚砜(DMSO)和1,2-丙二醇(PG)冷冻保存精子,解冻后的精子活力分别达到71.67±5.77%和68.33±7.64%,显著优于二甲基乙酰胺(DMAC)和甘油(Gly)两种抗冻剂冷冻保存精子的活力(P<0.05),但与鲜精活力(85.00±5.00%)存在显著差异(P<0.05)。从而对DMSO和PG的浓度进行优化筛选,结果显示:10%的DMSO冷冻保存精子活力达76.67%,高于15%和20%的DMSO(P>0.05);10%PG冷冻保存精子的活力达75.00±5.00%,显著高于15%和20%的PG(P<0.05)。利用盐度30-5的海水激活精子,结果显示盐度为30的海水适宜于七带石斑鱼精子激活,精子活力可达96.00±1.73%,低于此盐度激活精子的活力显著降低(P<0.05)。利用冷冻保存的七带石斑鱼精液与云纹石斑鱼卵进行杂交受精,受精率和孵化率分别可达68.08±22.46%和76.83±18.31%,与新鲜精子无显著性差异(P>0.05),同时表明七带石鱼冷冻精子与云纹石斑鱼可以进行杂交育种。本研究表明利用ES1-3配制10%的DMSO或PG可以大量冷冻保存性别转化的七带石斑鱼精液,并可将冷冻精子应用于人工繁殖育苗和杂交育种。更多还原