锦鲤鳍条细胞适宜消化方法和培养条件的初步探讨

【作者】 江海明； 潘厚军； 王庆； 石存斌； 吴淑勤；

【机构】 中国水产科学研究院珠江水产研究所；

【摘要】 目的:采用含10%血清的胶原酶消化法及常规胰酶消化法开展锦鲤鳍条细胞原代培养,同时通过不同培养基效果的比较选出较佳继代培养方案。方法:在一定时间里,对两种消化法的效果进行实验比较,每组7个样,在倒置显微镜下观察贴壁速度和增殖数量,并拍照记录。确定适宜消化方法后,将原代细胞做继代培养,分别使用L15、DMEM、M199、MEM四种培养基,血清含量为10%,在4块96孔板中培养8天并做生长曲线的比较。结果:研究结果表明采用含10%血清的胶原酶消化法,锦鲤鳍条细胞在原代培养7天后,在PH6.9-7.1、温度在26-28℃的培养基条件下,细胞平均贴壁数量比常规胰酶消化法明显多,且生长速度快,其形态为成纤维样细胞。使用4种不同的培养基做继代培养,通过连续8天的细胞计数,制作出细胞培养的生长曲线,发现使用含10%血清的DMEM培养基,细胞增殖最快,分裂最旺盛。结论:通过初步分析比较,胶原酶消化法和DMEM培养基适用于锦鲤鳍条细胞的原代和继代培养。更多还原