斜带石斑鱼(Epinephelus coioides)单核巨噬细胞集落刺激因子受体基因的克隆和原核表达

【作者】 钟正苹； 李安兴；

【机构】 中山大学生命科学学院有害生物控制与资源利用国家重点实验室；

【摘要】 单核巨噬细胞集落刺激因子受体(M-CSFR)全属酪氨酸蛋白受体家族,与巨噬细胞集落刺激因子(CSF-1)结合后发生二聚化,从而激活一系列信号传递,对巨噬细胞的生长,增殖,分化等起着重要作用。本文从斜带石斑鱼(Epinephelus coioides)头肾中克隆得到全长4404bp的巨噬细胞集落刺激因子受体基因cDNA序列,该序列包含长2937bp的ORF,编码978aa氨基酸,预期蛋白分子量为110.44 KD。该序测蛋白包括一段信号肽,4个Ig样区,一个跨膜区,一个酪氨酸激酶位点。经同源比对,该预期的氨基酸序列与金头鲷CSFR氨基酸序列同源性为88.13%,与斑马鱼同源性为63.46%,与鼠同源性为40.43%,与人同源性为39.92%。经RT-PCR检测,斜带石斑鱼CSFR基因在胸腺、头肾、脾脏、肾脏、肠、脑等组织中均有表达,其中在脾脏中的表达量最高。根据已获得的斜带石斑鱼CSFR序列,在胞外配体结合区设计引物,引入BglⅡ和XhoI酶切位点,将PCR扩增后的酶切产物连接到表达载体pET32a,在大肠杆菌BL21菌株中IPTG诱导表达,获得斜带石斑鱼CSFR包涵体蛋白。更多还原