牛蛙微卫星标记的分离及16S rRNA序列分析

【作者】 王晓清； 詹炜； 武嘉文；

【机构】 湖南农业大学动物科学技术学院；

【摘要】 牛蛙(Rana catesbeiana)于20世纪60年代引入我国后,养殖发展非常迅速,现为我国养殖的主要特种水产品之一。筛选牛蛙微卫星标记对种质资源现状及群体遗传多样性状况调查、品种纯度检测、分子标记辅助选择等研究奠定分子生物学基础。本研究用磁珠富集法富集含微卫星的DNA片段,将这些片段进行PCR扩增后,转入T载体中,构建牛蛙微卫星富集文库,从库中挑选阳性克隆用PCR检测出重组子,然后将重组克隆测序,共得到21条微卫星序列,设计引物进行多态性筛选,共找到11个含多态的微卫星标记,4个微卫星位点为单态,6个微卫星位点无扩增产物或非特异性扩增。同时用牛蛙16S rRNA基因序列引物对湖南、浙江、厦门三个群体牛蛙中各4个个体进行基因扩增,成功扩增牛蛙16S rRNA片段,测序得到约530 bp的序列片段,分析得出12个个体碱基序列无差异,查找并比对网上已经公开的蛙属种类16S rRNA基因序列,构建系统树分析表明该序列为牛蛙特有,能将牛蛙和蛙属中其他种类区分开来。更多还原