干预CYP2J3/EETs系统对缺氧后处理大鼠心肌凋亡的影响

【作者】 王红霞； 曾翔俊； 张冬梅； 芦玲巧； 刘娜； 张立克；

【机构】 首都医科大学病理生理学教研室；

【摘要】 目的本工作通过复制心肌原代乳鼠心肌细胞H/R损伤和HPO模型,观察CYP2J3基因转染后H/R心肌细胞以及给予CYP450表氧化酶抑制剂后缺氧后处理心肌凋亡的改变,证实CYP2J3/EETs系统通过影响细胞凋亡而介导缺氧后处置心脏保护作用。方法采用消化贴壁法分离乳鼠原代心肌细胞,采用缺氧3 h,复氧2 h方法复制心肌细胞H/R模型。随机分为7组:对照组(CON)、模型组(H/R)、缺氧后处理组(HPO)、MS-PPOH组(MSPPOH)、CYP2J3基因转染组(CYP2J3)、H/R+CYP2J3基因转染组(H/R+CYP2J3)、HPO+MS-PPOH组(HPO+MSPPOH)。采用MTT检测心肌细胞存活率;采用RT-PCR检测CYP2J3mRNA的水平,采用Western-Blot检测CYP2J3蛋白的表达水平,采用高效液相色谱方法(high pressure liquid chromatography,HPLC)检测心肌培养液11,12-环二十碳三烯酸(11,12-Epoxyeicosatrienoic Acid,11,12-EET)水平;采用Hoechst染色和TUNEL检测心肌细胞凋亡率,采用Western-Blot检测心肌细胞Caspase-3、Bax和Bcl-2蛋白的表达。结果①与H/R组比较,HPO组和H/R+2J3组心肌细胞存活率明显增加(P<0.01),而加入抑制剂后的HPO+MS-PPOH组和H/R+CYP2J3组削弱了HPO对心肌的保护作用。单纯给予MS-PPOH和CYP2J3基因转染心肌细胞的存活率与CON组无明显影响。②与H/R相比,HPO组和H/R+CYP2J3基因转染组上调CYP2J3mRNA、CYP2J3蛋白及11,12-EET含量水平,HPO+MSPPOH能逆转HPO的心脏保护作用。MS-PPOH和CYP2J3基因转染组与CON组无明显影响。③心肌细胞缺氧/复氧后,细胞出现明显的凋亡,Hoechs染色可见大量凋亡小体,TUNEL染色也可见大量染色阳性的凋亡细胞。Western-Blot结果显示,Caspase-3活性增加,Bcl-2与Bax比值降低。与H/R组相比较,HPO和H/R+CYP2J3组心肌细胞凋亡减少,Caspase-3活性下降,Bcl-2与Bax比值升高。结论 HPO可能通过上调CYP2J3/EETs系统进而减少心肌细胞凋亡而拮抗心肌H/R损伤。更多还原