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牛分枝杆菌MPB83基因的原核表达及免疫活性分析
【机构】 吉林特产研究所；
【摘要】 利用PCR技术从牛型分枝杆菌（M.bovis）Vallee菌株的全基因组DNA模板中扩增出了600bp的MPB83全基因片段,将PCR产物克隆至pMD18-T载体中,经核苷酸序列测定进行确证后,KpnIⅠ/EcoRⅠ双酶切后亚克隆到原核表达载体pET30a的相同酶切位点,构建成表达质粒pET-MPB83,将鉴定的重组质粒转化大肠杆菌BL21（DE3）中,IPTG诱导后SDS-PAGE检测表达情况,重组质粒pET-MPB83在30Ku处有一特异表达带,与预计大小相符。经Ni柱纯化后,Western-blot检测纯化蛋白具有免疫活性,用纯化的该蛋白进行动物（兔）接种制备抗血清,用Western-blot和ELISA检测该抗血清的效价和特异性。总之,获得了该基因的克隆;蛋白表达,相对分子量为30Ku;用Ni获得了大量纯化的蛋白,经检测接种动物后制备的抗血清有较好特异性。
- 【会议录名称】 增强自主创新能力 促进吉林经济发展——启明杯·吉林省第四届科学技术学术年会论文集（下册）
- 【会议名称】增强自主创新能力 促进吉林经济发展——启明杯·吉林省第四届科学技术学术年会
- 【会议时间】2006-10-13
- 【会议地点】中国吉林长春
- 【分类号】S852.61
- 【主办单位】吉林省科学技术协会