应用多重PCR方法进行lncRNA功能研究

【作者】 沈远； 付汉江； 朱娟娟； 刘珊珊； 钟一然； 郑晓飞；

【机构】 军事医学科学院放射与辐射医学研究所； 吉林大学生命科学学院；

【摘要】 随着越来越多具有功能lncRNA被发现,lncRNA新的作用机制也逐步被揭示出来。然而,大多数lncRNA对研究中通常检测的细胞生物学效应的影响不明显,使lncRNA功能研究受到了制约。我们希望通过检测表达受到lncRNA影响的基因,进而推断出lncRNA相关功能。为此,我们将多重PCR的方法应用到了lncRNA功能研究中。多重PCR是在同一PCR反应体系里可以同时扩增多个基因片段的PCR反应。目前多重PCR应用于对多种病原微生物的同时检测、遗传病及癌基因的分型鉴定等,具有高效、系统、经济、简单等特点。我们选取了针对细胞DNA损伤、细胞周期凋亡、细胞信号转导及多梳蛋白基因等与癌症发生发展相关的124个重要基因,设计了35组多重PCR引物,通过优化dNTP、镁离子和DNA聚合酶的浓度及配比,使多重PCR引物在HepG2和HeLa等细胞系相关基因检测中具有良的特异性。应用上述多重PCR体系,我们对过表达及干涉特定lncRNA的细胞系进行了基因表达分析,获得了受候选lncRNA表达影响的不同生物学过程中的重要基因。利用多重PCR检测方法不仅有助于发现lncRNA分子的生物学功能,也便于揭示lncRNA在不同生物学通路中的作用。更多还原