Caveolin-1上调小鼠肝癌细胞与fibronectin的粘附依赖于α-2,6连接唾液酸结构的增加

【作者】 于生金； 樊建慧； 柳林华； 张丽君； 李楠洋； 张嘉宁； 汪淑晶；

【机构】 大连医科大学生物化学与分子生物学教研室糖生物学研究所； 辽东学院医学院；

【摘要】 目的:陷窝蛋白-1(Caveolin-1)是胞膜窖的主要结构和功能成分,目前认为,其在肝癌中发挥癌基因样作用。α-2,6连接唾液酸结构由α-2,6唾液酰基转移酶-I(ST6Gal-I)催化形成,ST6Gal-I在人肝癌组织中表达水平显著增加。本实验旨在探讨Caveolin-1及α-2,6连接唾液酸结构在小鼠肝癌细胞与细胞外基质粘附过程中发挥的作用及具体的机制。材料和方法:构建稳定表达Caveolin-1的Hepa1-6细胞系(Hepa1-6/Cav-1);利用siRNA表达载体下调Hca-F细胞中Caveolin-1表达;通过siRNA下调Hca-F细胞中ST6Gal-I表达;Real-time PCR分析ST6Gal-I的mRNA水平;Western blot分别检测Caveolin-1、ST6Gal-I、FAK、ERK的总蛋白水平及FAK和ERK的磷酸化水平;Lectin blot检测α-2,6连接唾液酸结构;细胞粘附实验分析细胞粘附能力的改变。结果和分析:Hca-F细胞中高表达Caveolin-1和ST6Gal-I,Hepal-6细胞中Caveolin-1表达缺失并低表达ST6Gal-I。通过RNA干扰技术下调Hca-F中Caveolin-1后,α-2,6连接唾液酸水平明显减少并抑制了Hca-F细胞与纤连蛋白(fibronectin)的粘附及局部粘着斑激酶(FAK)粘附信号;相反,在Hepa1-6细胞中稳定表达Caveolin-1(Hepal-6/Cav-1)后,显著上调了α-2,6连接唾液酸结构及fibronectin介导的细胞FAK磷酸化水平。进一步研究表明,通过siRNA下调Hca-F细胞的ST6Gal-I表达或利用唾液酸酶降解Hepal-6/Cav-1细胞中α-2,6连接唾液酸结构后,明显抑制了fibronectin依赖的细胞粘附及FAK的磷酸化。结论:Caveolin-1能够上调小鼠肝癌细胞α-2,6连接唾液酸结构;Caveolin-1通过增加α-2,6连接唾液酸水平促进细胞与fibronectin的粘附并活化FAK信号。更多还原