鱼藤酮降低大鼠中缝背核色氨酸羟化酶的表达

【作者】 刘树锋； 石葛明； 王磊； 李双成； 康云霄； 王伟；

【机构】 河北省实验动物中心河北省实验动物实验室； 河北医科大学神经生物研究室；

【摘要】 目的以往的研究发现慢性长期小剂量接触鱼藤酮的大鼠出现中脑黑质多巴胺能神经元数量的减少、以及黑质-纹状体酪氨酸羟化酶的显著降低。鱼藤酮的毒性作用主要表现在抑制线粒体复合物Ⅰ和细胞内微管的解聚。后者导致突触囊泡顺行轴浆转运受阻,引起胞浆内游离的多巴胺含量增加。游离的多巴胺被氧化后产生过多的氧自由基,诱发细胞损伤,这很可能是鱼藤酮对脑内多巴胺能神经元产生特异性损伤的主要原因。作为同属单胺类的5羟色胺(5-HT)能神经元是否同样受到类似的影响尚不十分清楚。因此,本研究期望通过观察分析鱼藤酮大鼠中脑中缝背核色氨酸羟化酶(TPH)的表达变化,探讨其对5-HT能神经元的影响。方法选用健康、成年雄性Wistar大鼠,随机分为实验组和对照组。实验组背部皮下注射鱼藤酮乳化液1.5 mg/(kg·d),对照组注射等量的溶剂。免疫细胞化学检测的大鼠以4%多聚甲醛经心灌注固定,取中脑节段冷冻切片、间断集片,行SABC法显示TPH表达变化。免疫印记及流式细胞技术检测的大鼠在深麻醉下迅速断头取中脑节段。用于免疫印记的组织经裂解匀浆提取并测定蛋白浓度后,行SDS-PAGE凝胶电泳、ECL增强化学发光法检测TPH含量的变化(以actin为内参照),计算其与β-actin免疫印迹条带相对吸光度的比值。用于流式细胞检测的组织制备单细胞悬液,经TPH一抗孵育、异硫氢荧光素免疫球蛋白(FITC-IgG)二抗孵育后,上机检测,计数TPH表达量的X-mode值。结果实验组大鼠中脑中缝背核TPH免疫反应阳性神经元数目(40.17±8.28)比对照组(49.86±3.82)减少了19.43%(P<0.01),中缝背核TPH免疫反应阳性神经元减少的亚核团尤以中缝背核外侧部为甚;免疫印迹检测发现实验组大鼠TPH与β-actin的吸光度比值(0.44±0.12)明显低于对照组TPH与β-actm的吸光度比值(0.64±0.09)(P<0.05),比对照组降低了31.25%;流式细胞间接免疫荧光法测得实验组TPH的表达量(83.37±17.04)比对照组(322.30±34.40)降低降低了74.13%(P<0.01)。结论鱼藤酮对5-HT能神经元具有明显的神经毒性,表现为5-HT能神经元数量的减少及TPH表达的降低。更多还原