表阿霉素联合AAV-TRAIL用于类风湿关节炎的治疗及其作用机制研究

【作者】 史娟； 周剑锁； 朱洁卿； 袁海芹； 尤欣； 刘彦信； 郑德先；

【机构】 北京协和医学院基础医学院； 中国医学科学院基础医学研究所；

【摘要】 研究背景:类风湿性关节炎( Rheumatoid arthritis, RA)是一种以致残性多关节滑膜炎为特征的常见的慢性自身免疫性疾病,关节滑膜表面的成纤维样滑膜细胞(fibroblast-like synoviocytes,FLS)呈类肿瘤样生长,在 RA的长期病程中起关键作用,诱导 RA滑膜细胞凋亡可为寻找新的 RA治疗药物提供一种新途径。TRAIL(Tumor Necrosis Factor Related Apoptosis Inducing Ligand,肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体)是肿瘤坏死因子(TNF)超家族的成员,TRAIL能够诱导多数肿瘤细胞凋亡。目的:本论文基于TRAIL可诱导肿瘤细胞发生凋亡的特点探讨了将腺相关病毒(AAV)-TRAIL应用于类风湿关节炎基因治疗的可行性。方法:采用基因工程技术将TRAIL序列克隆入AAV表达载体,用包装细胞进行病毒包装、超速离心纯化病毒,获得足够量的重组病毒;从 RA患者膝关节置换术后关节切除物分离培养实验所用FLS细胞;ELISA法测定重组病毒感染后的细胞上清中TRAIL的表达水平;采用MTT法检测成纤维样滑膜细胞(FLS)存活率;Ⅱ型胶原诱导的小鼠关节炎(CIA)中检测重组病毒对类风湿关节炎的治疗效果。结果:对不同亚型的AAV病毒进行了筛选,体外研究发现r AAV2/5亚型对 RA病人FLS细胞的侵染率更高。化疗药物表阿霉素可显著增强r AAV2/5在FLS中介导的外源基因表达,在CIA小鼠中表阿霉素同样可以增强AAV-TRAIL的表达,r AAV2/5-TRAIL组关节组织TRAIL表达水平为10.49±1.89 pg/mg,而在r AAV2/5-TRAIL和EPB联用组TRAIL表达水平提高到61.70±23.33 pg/mg。研究其机制发现表阿霉素可能通过增强P53、DR4、DR5水平,抑制FLIP来提高TRAIL对FLS的凋亡诱导活性。在II型胶原诱导的CIA关节炎小鼠模型中,膝关节内注射r AAV2/5-TRAIL并与表阿霉素联用可显著使关节炎小鼠发病率明显降低,病情明显改善,关节红肿明显减轻。CIA小鼠膝关节切片HE染色发现表阿霉素和r AAV2/5-TRAIL联用的小鼠关节部位炎性细胞浸润均不明显,滑膜增生轻微,无明显软骨破坏及骨浸润等。结论:发现rA AV2/5-TRAIL和亚毒性剂量的化疗药物EPB联合应用可以大大提高rA AV2/5-TRAIL对类风湿关节炎的治疗作用,为重组AAV-TRAIL用于类风湿关节炎的基因治疗提供了新的资料。更多还原