六亚甲基二乙酰胺对HL-60细胞分化相关基因C/EBPα、C/EBPε表达的影响

【作者】 任霞； 王恒孝； 温培娥； 姜国胜；

【机构】 山东省医学科学院基础医学研究所；

【摘要】 背景:六亚甲基二乙酰胺(hexamethylene bisacetamid,HMBA)是一种低分子极性化合物,作为一种有效的诱导分化剂已在美国进入Ⅱ期临床试验,用于治疗骨髓增生异常综合征(MDS)和难治性急性髓系白血病(AML),并取得了一定疗效。许多体外研究表明其作用机制主要是阻滞多种肿瘤细胞株于G1期、抑制细胞生长、诱导瘤细胞发生终末分化,但其具体分子机制还不十分清楚。CCAAT/增强子结合蛋白(C/EBPs)是调节细胞分化和生长的因子。这些因子尤其是C/EBPα及C/EBPε在正常的髓细胞生成中起重要作用。CEBPs活性缺失在包括AML在内的髓系紊乱的发病机理中也起作用。C/EBPα是与终末分化和细胞周期阻滞相关的髓特异性转录因子,其在粒细胞分化的关键功能是抑制E2F,导致c-myc下调和增殖抑制。C/EBPε是调控粒细胞和单核巨噬细胞分化成熟的关键基因,研究表明C/EBPε可模仿T RA效应,诱导细胞向粒系分化。为此我们初步假设HMBA诱导HL-60细胞分化有可能与C/EBPα及C/EBPε基因表达变化相关。目的:研究六亚甲基二乙酰胺(HMBA)诱导髓系白血病HL-60细胞分化过程中C/EBPα及C/EBPε基因的表达变化,探讨HMBA的作用机制。方法:采用MTT法检测HMBA作用后HL-60细胞的增殖状态,观察细胞形态学变化,运用流式细胞术测定细胞分化抗原CDllb的表达,并进行细胞周期分析,半定量 RT-PCR及Western blot分析C/EBPα、C/EBPε基因mRNA及蛋白的表达。结果:HL-60细胞经2 m M HMBA处理后细胞增殖受到较明显的抑制,24h、48h、72h、96h后抑制率分别为25.4±3.5%,36.7±0.6%,45.3±4.7%,51.6±2.8%。HL-60细胞经2 m M HMBA处理后,细胞形态学上趋于分化成熟,细胞周期停滞于G0/G1期,96h后CDllb表达显著增高,由最初的0.98%提高到24.16%; RT-PCR及Western blot显示HMBA诱导后HL-60细胞中C/EBPα、C/EBPε表达均逐渐增强。结论 HMBA可能是通过上调C/EBPα、C/EBPε基因表达,提高C/EBPα、C/EBPε活性,从而诱导HL-60细胞向粒系分化。更多还原