新型抑癌基因ZHX2对脂蛋白脂肪酶的调节作用及其机制研究

【作者】 马洪鑫； 梁晓红； 高立芬； 岳学田； 张真瑜； 刘鹏； 马春红；

【机构】 山东大学医学院免疫学研究所；

【摘要】 背景及目的:血脂异常是许多慢性疾病如心脑血管疾病、慢性肝病、糖尿病等的一个主要危险因素。新近研究发现转录抑制因子ZHX2可以调节小鼠血脂水平,是脂蛋白代谢的一个潜在的调节因子。ZHX2最初被认为可以通过与NF-YA相互作用发挥转录抑制作用。我们实验室最近研究发现ZHX2在肝癌发生中发挥抑癌基因作用,ZHX2可以通过调节细胞周期蛋白抑制肝癌细胞生长,肝细胞内ZHX2表达缺失与肝癌进展显著负相关。肝脏在脂质代谢及运输中发挥重要作用,本研究旨在研究ZHX2对脂质代谢关键酶脂蛋白脂肪酶LPL的调控作用及机制。方法:为明确ZHX2对LPL的影响,将ZHX2的过表达质粒及特异性的小干扰片段分别转染不同的细胞系,蛋白印迹及 RT-PCR技术检测LPL的表达。双荧光素酶报告基因及共转染实验研究ZHX2对LPL系列截短启动子及突变启动子活性的影响。染色质免疫共沉淀(Ch IP)分析ZHX2与LPL的相互结合作用。结果:ZHX2过表达显著抑制CHO及HepG2细胞中LPL的表达,而干扰ZHX2可以明显增强SMMC7721及QSG7701细胞中LPL的表达,提示ZHX2抑制LPL表达。双荧光素酶报告基因检测结果证实ZHX2以剂量依赖性方式抑制LPL启动子活性。进一步缺失实验发现,ZHX2抑制LPL转录依赖于LPL启动子的-96到-38区的存在,Ch IP实验结果显示ZHX2能与LPL启动子的-96到-38区段结合,转录因子预测软件TFSEA RCH预测此区域包含三个转录因子结合位点:S RE,CCAAT和Octamer。当我们将位于-46位点的Octamer突变后,ZHX2对LPL启动子活性的抑制作用消失。结论:ZHX2通过与LPL启动子区(-96到-38)结合抑制其转录,而且Octamer很可能是ZHX2与LPL相互作用的位点。我们的研究结果不仅揭示了新的脂质调控新通路,并为脂质异常相关疾病治疗提供了新思路更多还原