重组腺病毒AdIL-18BP/IL-4基因修饰的胎肝细胞经脾移植对Con-A诱导的肝炎小鼠的保护作用

【作者】 钱韵； 张立煌； 姚航平；

【机构】 浙江大学医学院附属第一医院；

【摘要】 目的:观察表达IL-18BP和IL-4的重组腺病毒基因修饰的胎肝细胞(Ad IL-18BP/IL-4/BNL.CL2)经脾移植,对Con-A诱导的肝炎小鼠的保护作用。方法:BNL.CL2小鼠胎肝细胞转染重组腺病毒Ad IL-18BP/IL-4后,ELISA法检测IL-4的表达,Western blot法检测IL-18BP的表达。实验组小鼠经脾移植Ad IL-18BP/IL-4/BNL.CL2,同时设Lac Z病毒对照组(Ad-Lac Z/BNL.CL2),BNL.CL2细胞对照组、模型组及正常对照组。移植10天后Ad IL-18BP/IL-4/BNL.CL2组、Lac Z病毒对照组、BNL.CL2细胞对照组及模型组小鼠均注射Con A(15mg/Kg)诱导实验性肝炎。Con-A注射18小时后处死小鼠,留取血清,制备肝组织匀浆液及肝组织石蜡切片。ELISA法检测血清细胞因子(TNF-α,IL-18,IL-4,IL-10,IL-12p70,MCP-1)的表达水平及谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)水平。肝组织HE染色观察炎症浸润及肝细胞变性坏死等。ELISA法检测肝组织匀浆液中细胞因子(TNF-α,IL-18,IL-4,IL-10,IL-12p70,MCP-1)的表达。Western blot法检测肝组织匀浆液中p38,AKT,NFKB,JNK1/2等细胞信号分子表达。结果:Ad-IL-18BP/IL-4在BNL.CL2小鼠胎肝细胞中表达IL-18BP/IL-4,并能持续14天。经脾移植Ad IL-18BP/IL-4/BNL.CL2的实验组小鼠血清ALT及AST水平显著低于其他Con-A诱导肝炎对照组,血清及肝组织匀浆液中TNF-α,IL-18,IL-12p70及MCP-1水平显著低于其他Con-A诱导肝炎对照组,而IL-4和IL-10水平显著增高,肝组织炎症细胞浸润及坏死区域减少。同时,经睥移植Ad IL-18BP/IL-4/BNL.CL2的实验组小鼠的肝组织匀浆液中NF-κB p65,AKT,p38及JNK1-2的磷酸化水平均显著低于其他Con-A诱导肝炎对照组。结论:Ad IL-18BP/IL-4能有效转染至BNL.CL2小鼠胎肝细胞并表达IL-18BP/IL-4。重组腺病毒Ad IL-18BP/IL-4基因修饰的胎肝细胞经脾移植后,通过抑制NF-κB p65,AKT,p38及JNK1-2活性,显著减轻Con-A诱导的实验性肝炎的炎症反应,抑制Th1类细胞因子表达,促进Th2类细胞因子的分泌。更多还原