PDCD4在脂多糖联合D-半乳糖胺诱导急性肝损伤中的作用研究

【作者】 王晓言； 张利宁； 王晓燕；

【机构】 山东大学免疫研究所；

【摘要】 研究背景:程序性死亡因子4,PDCD4(programmed cell death 4,PDCD4)是近年来发现的抑癌基因,现以证实它可以通过干扰蛋白的翻译或抑制AP-1的转录活性抑制肿瘤的生长与转移。陈有海教授通过研究PDCD4基因敲除(PDCD4-/-)C57BL/6小鼠,发现该小鼠对I型糖尿病及实验性自身免疫性脑脊髓膜炎(EAE)的发生有抵抗,并且近年来许多研究发现PDCD4不仅具有抑癌作用,还与炎症的发生相关。由肠源性内毒素导致的急性肝损伤是临床上常见的肝功能衰竭的原因之一。内毒素的主要活性成份是脂多糖(lipopolysacchrides,LPS),LPS具有广泛的生物学效应:(1)促进肝枯否细胞分泌多种炎性细胞因子,如TNF-α、IL-1β和IL-6等,这些炎性因子特别是TNF-α的作用可造成肝细胞凋亡及炎性细胞的浸润;(2)直接或通过炎性因子的作用破坏血管内皮细胞的完整性,造成微血管损伤及微血栓的形成,引起肝内出血和肝细胞的坏死。目的:探讨PDCD4在内毒素诱导急性肝损伤中的作用。方法:PDCD4敲基因(PDCD4-/-)小鼠为实验组,以同系且同年龄的野生型C57小鼠为对照组,采用采用50μg/kg LPS及800mg/kg D-GalN腹腔注射建立内毒素性急性肝损伤动物模型。分别留取注射后0,3,5h的血清和肝脏标本进行检测。(一)观察肝脏大体观,并比较两组小鼠肝重和体重的比值,利用HE染色做病理学检测,利用TUNEL凋亡检测试剂盒检测肝细胞凋亡情况。(二)用赖式发检测血清中ALT、AST的含量,并用ELISA试剂盒检测炎性细胞因子TNF-α、IL-1β、IL-6的含量。(三)用 RT-PCR的方法检测肝脏组织内炎性因子在mRNA水平的表达情况。(四)用免疫组化的方法检测凋亡相关蛋白Caspase-3的活化情况。(五)用Western-Blot的方法检测近一步检测肝脏细胞中Caspase-3的表达情况和两条主要的炎症信号通路MAPK和NF-κB的活化情况。结果:(一)在LPS/D-GalN诱导的急性肝损伤中,PDCD4-/-小鼠的肝损伤程度显著高于C57小鼠。(二)PDCD4-/-小鼠的血清炎性因子(TNF-α、IL-1β、IL-6)水平和肝组织中mRNA的炎性因子水平都显著高于C57小鼠。(三)PDCD4-/-小鼠促进LPS/D-GalN诱导的肝脏内MAPK通路的活化。注射后3h,PDCD4-/-小鼠肝脏组织中P-JNK的水平显著高于C57小鼠,注射后5h,PDCD4-/-小鼠肝脏组织中P-E RK,P-P38水平都显著高于C57小鼠。(四)PDCD4-/-小鼠促进LPS/D-GalN诱导的肝脏内NF-κB通路的活化。注射后3h和5h,PDCD4-/-小鼠肝脏组织中P-P65的水平显著高于C57小鼠。结论:PDCD4在LPS/D-GalN诱导的急性肝损伤中对肝脏起到保护作用。更多还原