HMGB1参与小鼠心脏移植慢性排斥反应/心脏移植物血管病变的研究

【作者】 邹慧娟； 汤贤英； 熊平； 徐勇； 方敏； 谭政； 龚非力； 郑芳；

【机构】 华中科技大学同济医学院免疫学系；

【摘要】 研究背景:HMGB1(high mobility group box-1 protein)是存在于真核细胞核内的非组蛋白染色体结合蛋白,主要存在于胞核内,其可通过两个途径释放到胞外:损伤或坏死的细胞被动分泌及激活的单核/巨噬细胞、上皮细胞、内皮细胞等通过囊泡相关途径主动分泌。同种器官移植中HMGB1表达和释放增加,通过介导同种反应性T细胞应答而参与急性排斥反应发生和移植物组织损伤,因此HMGB1在移植排斥所致组织损伤中发挥重要作用。但迄今尚未见有关HMGB1参与心脏慢性排斥反应的作用及其机制的文献报道。心脏移植慢性排斥反应主要表现为心脏移植物血管病变(CAV),其中组织细胞持续损伤和免疫细胞持续激活是否促进更多HMGB1被释放,由此形成恶性循环,导致急性排斥反应低强度持续存在并慢性化,是探讨移植心脏冠状血管慢性病变的细胞和分子机制,从而成为探索潜在的治疗靶点的重要理论和依据。目的:本研究拟建立小鼠腹腔异位心脏移植慢性排斥反应模型,在CAV发生的不同阶段(时间点)检测移植物微环境中HMGB1水平,分析其与移植心脏病理组织学改变的相关性,以确认HMGB1是否参与心脏移植物CAV/慢性排斥反应发生的作用。方法:正常B6.H-2bm12(Bm12)小鼠为供体,C57BL/6(B6)小鼠为受体,建立小鼠腹腔异位心脏移植模型。实验分为两组:正常B6小鼠作为供体的对照组;移植后慢性排斥反应组。手术后分组喂养,于第14天、28天、56天组织切片行HE和EVG染色观测移植物是否发生典型的慢性排斥反应。运用免疫组织化学、Western blot等方法检测HMGB1蛋白在CAV/慢性排斥进程中供心内的表达分布变化。结果:组织形态学观察示:移植心脏心肌组织内有大量淋巴细胞浸润;在移植后14天左右CAV开始发生;随着移植后时间延长,CAV逐渐加重,冠脉数量减少,血管内膜和平滑肌增殖,管腔向心性狭窄,周围组织明显纤维化,第56天动脉血管完全阻塞;免疫组化结果表明,移植手术后,胞外HMGB1表达增多;Western blot检测发现,移植手术后,HMGB1持续上升并达到高峰,同时伴随移植物损伤逐渐加重。结论:本研究建立的小鼠腹腔异位心脏移植慢性排斥反应模型中收获的移植心脏标本在组织形态学上反映了CAV和心肌纤维化发生、发展的过程,为研究心脏移植后相关疾病提供了理想的组织标本。移植术后反复发作的慢性排斥反应进程中,移植物组织细胞损伤及局部免疫细胞(巨噬细胞、血管内皮细胞等)激活可能导致HMGB1持续释放,从而成为介导移植物组织持续性、慢性损伤的潜在关键因素。更多还原