变异链球菌蛋白质提取中裂解液的比较研究

【作者】 温艳丽； 万呼春； 张菲菲； 何永红；

【机构】 四川大学华西口腔医学院； 口腔疾病研究国家重点实验室；

【摘要】 目的:探索适合变异链球菌蛋白质提取的裂解液。方法:配制4种成分不同的裂解液,即裂解液Ⅰ(30mM Tris-HCl,0.3%SDS,1.0%DTT)、裂解液Ⅱ(30mM Tris-HCl,4%CHAPS,1.0%DTT)、裂解液Ⅲ(30mM Tris-HCl,0.3%SDS,1.0%DTT,7M脲,2M硫脲,5mM PMSF)和裂解液Ⅳ(30mM Tris-HCl,4%CHAPS,1.0%DTT,7M脲,2M硫脲,5mM PMSF)。将变链菌分别悬浮于4种裂解液中,在相同超声处理条件下提取变异链球菌总蛋白。通过处理后菌悬液涂片染色、提取蛋白质SDS-PAGE和提取蛋白质浓度测定,对裂解液提取变链菌蛋白质效果进行评价。结果:(1)革兰氏染色显示,变链菌在裂解液Ⅲ和Ⅳ中呈分散状,破碎的细菌周围红染的碎片呈絮状分布,其细菌细胞壁破碎程度高于裂解液Ⅰ和Ⅱ。(2)SDS-PAGE图谱显示,4种裂解液提取的蛋白质条带分布基本一致,裂解液Ⅱ提取的蛋白质条带丰度明显低于其他三种裂解液:裂解液Ⅲ、Ⅳ提取的蛋白质条带丰度无明显差异,均略高于裂解液Ⅰ。(3)四种不同裂解液提取的变链菌蛋白质质量浓度有差异(P<0.05),其中,裂解液Ⅲ和Ⅳ提取的变链菌蛋白浓度明显高于裂解液Ⅰ和Ⅱ(P<0.05);裂解液Ⅰ提取的变链菌蛋白浓度明显高于裂解液Ⅱ(P<0.05);裂解液Ⅲ提取的变链菌蛋白浓度要稍高于裂解液Ⅳ,但两者之间的差异无统计学意义(P>0.05)。结论:在采用超声法提取变链菌蛋白质时,提取介质成分对变链菌细胞壁的破碎程度、电泳分离后蛋白条带的清晰度和丰度以及提取的总蛋白浓度有影响。含有还原剂、去垢剂、离液剂和蛋白酶抑制剂的裂解液提取变链菌蛋白质的效果明显优于只含还原剂和去垢剂的裂解液。更多还原