凝固酶阴性葡萄球菌致病性分子标志物的建立与应用

【作者】 姜美娟； 王华强； 王丹丹； 刘妮妮； 于红； 梁冰；

【机构】 解放军第401医院检验科； 青岛大学医学院微生物教研室；

【摘要】 目的建立适用于常规检测的致病性凝固酶阴性葡萄球菌(coagulase-negative staphylococci,CoNS)特异性分子标志物,评价其临床意义。方法本文以生物膜形成作为致病因素,采用常规生化鉴定、刚果红试验、体外黏附性实验以及PCR等方法对临床标本中分离到的114株CoNS进行表型鉴定和特异性分子标志物的检测。结果 1、表皮葡萄球菌和溶血葡萄球菌为临床最常见的菌株,分别占总数的41.2%及37.7%。2、刚果红试验阳性结果为24例,阳性率约为21.1%。其中18例为表皮葡萄球菌,占总阳性率的75%。3、icaD片段扩增总阳性率是29.0%(33/114),表明大部分CoNS不表达胞外多糖,无致病性。4、选取12株菌(包括刚果红试验阳性PCR阴性3株,刚果红阴性PCR阳性3株,两法均阳性6株)进行体外黏附性实验,其阳性率为83.3%(10/12),但因实验例数较少,有待进一步验证。5、37例凝固酶阴性葡萄球菌样品进行了16S rDNA基因及sodA基因片段的PCR扩增,电泳检测结果显示全部样品均能准确地扩增出相应的片段,其片段大小分别为16S rDNA 926bp及sodA 482bp,且均为单一条带,序列测定表明所有样品16S rDNA及sodAPCR产物序列均相同。结论 1、本研究首次报道了除表皮葡萄球菌以外的其他种的凝固酶阴性葡萄球菌产生多糖胞间粘附因子的情况;2、表皮葡萄球菌在临床CoNS中检出最多,是携带icaD操纵子的主要菌种,其致病性应引起足够重视;3、ica操纵子可出现在多种CoNS中,临床实验室建立并常规进行凝固酶阴性葡萄球菌致病性的检测是有意义、有必要的;4、16S rDNA以及sodA基因可作为鉴定CoNS的基因标记,但不能用来作为致病性与非致病性的葡萄球菌的鉴别依据。5、目前区分致病性与非致病性的葡萄球菌的基因标志还是以串联存在的毒力基因ica D片段,其可被认为是获得性医院感染相关性CoNS特异的基因型或基因标志物。更多还原