格尔德霉素及其与顺铂联合应用对人卵巢癌细胞SKOV3作用机制的研究

【作者】 张正茂； 李正兰； 王梦华； 兰静；

【机构】 河北医科大学第四医院暨河北省肿瘤医院妇产科；

【摘要】 背景与目的:格尔德霉素（geldanamycin,GA）通过抑制热休克蛋白（heat shock protain 90,HSP90）从而导致细胞内信号调节通路网络的多点阻断,如导致涉及细胞增殖、细胞周期调节及幸存调节等众多效应蛋白的降解。前期研究证明HSP90可作为抗肿瘤治疗的一个分子靶位。本研究以人卵巢癌SKOV3细胞为研究对象,观察格尔德霉素对SKOV3细胞增殖的抑制作用,探讨其作用机制,并且将格尔德霉素与抗癌药物顺铂（DDP）联合应用检测对人卵巢癌细胞SKOV3的体外抑制作用。方法1.体外培养人卵巢癌SKOV3细胞,采用四甲基偶氮唑蓝（tetrzolium-based colorimetric assay,MTT）比色法检测格尔德霉素对该细胞增殖的影响;2.流式细胞术（flow cytometry,FCM）检测格尔德霉素作用后细胞周期及凋亡率的变化;3.细胞免疫化学法（ICC）及流式细胞术（FCM）分别检测格尔德霉素处理48h后SKOV3细胞Akt、raf-1蛋白的表达水平;4.MTT比色法检测格尔德霉素与顺铂联合应用对SKOV3细胞增殖的抑制作用,采用金氏公式分析相互作用指数（Interaction Index）,评价两药联合应用后的作用,如相互作用指数>0.85表示相加作用,相互作用指数<0.85为拮抗作用。结果:1.MTT法检测结果显示不同浓度（20、40、200、400、2000nmol/L）的格尔德霉素对SKOV3细胞的增殖均可产生抑制作用,且呈明显的时间-剂量依赖关系,最大抑制率可达（74.72±3.16）%。GA作用48h后的IC50为496.57nmol/L;2.经流式细胞术检测20、40、200、400、2000nmol/L的格尔德霉素作用48h后SKOV3细胞,随着药物浓度的增大,G₂/M期细胞逐渐增多,不同浓度组格尔德霉素均诱导细胞凋亡率的显著升高（P<0.05）;3.免疫细胞化学法及流式细胞术检测结果显示,经0、20、200、2000nmol/L格尔德霉素处理48小时后,SKOV3细胞中Akt、raf-1蛋白的表达随药物浓度增大而逐渐降低,与对照组相比,差异具有统计学意义（P<0.05）;4.MTT结果显示格尔德霉素与顺铂联合应用对SKOV3细胞的增殖有明显的抑制作用。20、40、200、400nmol/L的格尔德霉素联合顺铂对SKOV3细胞增殖的抑制作用随浓度的增加逐渐增强。金氏公式分析相互作用指数,计算结果显示不同浓度的顺铂联合不同浓度的格尔德霉素相互作用指数均>0.85。结论:1.格尔德霉素具有抑制卵巢癌细胞SKOV3的增殖及诱导其凋亡的作用。2.格尔德霉素的干预可导致SKOV3细胞中的Akt、raf-1蛋白的含量明显降低,表明格尔德霉素可能通过抑制PI3K-Akt、Ras/Raf/MEK/ERK信号通路的活化,进而影响SKOV3细胞的生长增殖及凋亡进程;3.格尔德霉素与顺铂联合应用可增强对其卵巢癌SKOV3细胞的增殖抑制作用。更多还原