草鱼TRAF6和TAK1基因克隆及其在多子小瓜虫感染时的表达分析

【作者】 赵飞； 李言伟； 潘厚军； 石存斌； 李安兴； 吴淑勤；

【机构】 中国水产科学研究院珠江水产研究所； 中山大学生命科学学院；

【摘要】 肿瘤坏死因子受体相关因子6(TRAF6)和转化生长因子β活化激酶1(TAK1)是TLR信号通路中两个重要的分子。截至目前,鱼类的TRAF6和TAK1是否参与及如何参与抗寄生虫的免疫反应仍未见报道。本研究首次克隆得到草鱼的TRAF6(CiTRAF6)和TAK1(CiTAK1)基因的cDNA全长序列。CiTRAF6的cDNA全长2250 bp,ORF为1629 bp,预测编码542 aa。BLAST分析显示,CiTRAF6与鲤TRAF6蛋白的同源性最高为93%。CiTRAF6包括1个N端的RING结构域、2个锌指结构、1个卷曲螺旋结构域和1个C端保守的MATH结构域。CiTAK1的cDNA全长2768 bp,ORF为1626 bp,预测编码541 aa。CiTAK1与斑马鱼TAK1蛋白的相似性最高为92%。CiTAK1在N端含有1个保守的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶催化结构域、1个甘氨酸富集环和1个铰链区域,在C端含有1个卷曲螺旋结构域。系统发育分析显示,CiTRAF6和CiTAK1蛋白均与鱼类的相应蛋白聚为一个分支,其中与鲤或斑马鱼的相应蛋白的亲缘关系最近。成功构建了CiTRAF6和CiTAK1的pEGFP-N1和pcDNA3.1真核表达载体,瞬时转染HEK293T细胞,结果显示CiTRAF6和CiTAK1都定位在HEK293T细胞的细胞质中。在HEK293T细胞中,过表达CiTRAF6和CiTAK1都可显著激活NF-κB活性,且存在一定的转染剂量依赖性。组织表达分析显示,CiTRAF6和CiTAK1在健康草鱼的所有被检组织中都有表达,但是在不同组织中其表达水平有所差异。在多子小瓜虫感染草鱼时,CiTRAF6和CiTAK1的基因表达谱比较相似,在皮肤、鳃、头肾和脾中,都主要表现为上调。以上结果表明草鱼TRAF6和TAK1在抗多子小瓜虫的免疫应答过程中可能发挥重要作用。更多还原