大黄鱼致病香鱼假单胞菌SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR检测方法的建立与应用

【作者】 周涛； 张继挺； 葛明峰； 王国良；

【机构】 宁波大学应用海洋生物技术教育部重点实验室；

【摘要】 根据香鱼假单胞菌(Pseudomonas plecoglossicida)的rpoD基因序列设计并合成一对特异性引物,经反应体系优化后建立了检测香鱼假单胞菌的SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR方法。结果显示,该方法线性关系良好,在Tm为60℃时,扩增产物的熔解曲线仅有单一的特异峰,扩增所得标准曲线为y=-3.448x+42.69,相关系数为0.998;检测灵敏度可达1.9×103copies/μL的DNA含量,与恶臭假单胞菌、副溶血弧菌、溶藻弧菌、创伤弧菌、海藻希瓦氏菌、嗜水气单胞菌、发光假单胞菌、鰤诺卡氏菌和海豚链球菌等不发生交叉反应,具有良好的特异性。应用建立的方法对2012年5月至11月9个批次采集的大黄鱼组织样品进行检测,检出率分析显示与大黄鱼内脏白点病发病季节相吻合。结果表明,建立的实时荧光定量PCR方法具有特异、敏感、快速、定量等优点,可用于大黄鱼内脏白点病的监测、检测和预防。更多还原