致病哈维弧菌多位点序列分析

【作者】 曾德乾； 冯娟； 徐力文； 苏友禄； 郭志勋；

【机构】 中国水产科学研究院南海水产研究所； 上海海洋大学水产与生命学院；

【摘要】 哈维弧菌(Vibrio harveyi)是重要的水产病原菌,本研究利用多位点序列分析(Multilocus sequence analysis,MLSA)方法对本实验室分离保种的82株哈维弧菌进行分析研究。这些哈维弧菌分离自广东、广西、海南三省沿海养殖鱼排(或水泥池)患病鱼体,参照文献或自行设计引物对管家基因:mreB、rctB、rpoD、topA、toxR进行PCR扩增、测序,对测序结果进行比对分析获得以下结果:5个管家基因的序列相似度依次为98.39%-100%、98.52%-100%、97.03%-100%、97.25%-100%、98.42%-100%,多态性位点比率依次为3.68%、4.01%、6.35%、5.04%、4.73%;串联基因序列相似度为97.54%-100%,多态性位点比率为3.68%-5.87%;说明这5个管家基因的遗传突变率较小,提示这些不同来源的哈维弧菌亲缘关系较近,遗传差异性小。基于单基因序列和串联基因序列,进一步利用MEGA4.0软件的NJ法构建系统进化树,获得:这些哈维弧菌可以聚类为7个大小不一(菌株含量不同)的聚群,同一聚群的菌株来源不完全相同;75.6%(62株)的实验菌株形成10个特定亚群,其所含有的菌株在所有NJ树中不变,且分离自相同宿主的菌株量较之分离自相同的采样时间或相同采样地点的菌株量高;其余实验菌株在进化树的分枝上存在可变性。以上几点说明这些不同来源的病原哈维弧菌具有较高相似度的遗传多样性。更多还原