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鲤疱疹病毒Ⅱ型(Cyhv-2)膜糖蛋白基因ORF25的原核表达及多克隆抗体的制备
【作者】 刘广鑫； 李泽明； 林蠡； 袁军法； 李莉娟； 王敏； 刘学芹；
【机构】 华中农业大学水产学院水生动物医学系； 农业部淡水生物繁育重点实验室； 淡水水产健康养殖湖北省协同创新中心；
【摘要】 根据GenBank上公布的鲤疱疹病毒II型(Cyhv-2)基因序列,设计合成其膜糖蛋白基因ORF25的特异性引物,以本实验室分离鉴定的Cyhv-2基因组为模板,通过PCR扩增ORF25基因,再将其克隆至PGEX-KG原核表达载体中,成功构建了PGEX-KG-ORF25重组子。后转化大肠杆菌E.coli BL-21菌株,经IPTG诱导,表达了分子量约为42kD的重组蛋白,SDS-PAGE检测结果表明,该重组表达蛋白以包涵体形式表达。以纯化的融合蛋白作为抗原免疫4-6周龄BALB/C小鼠。每2周免疫1次,第4次免疫2周后,眼眶采血,分离血清,获得多克隆抗体。通过酶联免疫吸附实验(ELISA)检测其抗体效价,结果表明该多抗的效价大于1:6400。本研究为建立检测Cyhv-2抗体和抗原的诊断方法、相关蛋白功能检测等研究奠定了基础。
【基金】 国家自然科学基金(30901118,31172433);国家科技支撑计划(2012BAD25B06);中央高校基本科研业务费专项资金(2011PY121,2013PY071)
- 【会议录名称】 中国水产学会鱼病专业委员会2013年学术研讨会论文摘要汇编
- 【会议名称】中国水产学会鱼病专业委员会2013年学术研讨会
- 【会议时间】2013-11-05
- 【会议地点】中国海南海口
- 【分类号】S943
- 【主办单位】海南大学、国家大宗淡水鱼类产业技术体系病害防控功能研究室、中国水产学会鱼病专业委员会、中国科学院水生生物研究所