华支睾吸虫已糖激酶的生物信息学分析、克隆表达及表达特性分析

【作者】 陈庭金； 尚梅； 李然； 黄艳； 宁丹； 邓传欢； 徐劲； 余新炳；

【机构】 中山大学中山医学院寄生虫教研室； 中山大学热带病防治研究教育部重点实验室；

【摘要】 目的利用生物信息学方法分析华支睾吸虫已糖激酶(CsHK)全长基因的结构和功能,并将该基因克隆至原核表达载体进行表达、纯化,初步了解其重组产物的免疫学功能。方法利用BLAST等生物信息学软件分析CsHK蛋白的基本理化特征和三维结构;将CsHK基因克隆到原核表达质粒pET-28a(+)中,诱导表达并用镍离子金属螯合剂亲和层析柱进行纯化;使用纯化的CsHK蛋白免疫SD大鼠,获得抗血清;用Western blot进行免疫反应性及免疫原性分析;应用免疫荧光化学法观察CsHK蛋白在华支睾吸虫成虫的定位。结果 CsHK基因编码序列长度为1350bp,编码449个氨基酸,理论分子质量为49963.5Da,具有已糖激酶完整功能域;该基因在大肠埃希菌BL21/DE3中可溶性表达,经亲和层析获得了高纯度蛋白;重组蛋白可被其免疫的SD大鼠血清、华支睾吸虫感染SD大鼠血清识别;CsHK蛋白主要定位于虫体肠支、卵黄腺、虫卵、子宫、储精囊。结论构建的pET-28a(+)-CsHK能在大肠埃希菌中高效表达可溶性CsHK蛋白。该蛋白具有良好的抗原活性,主要分布在华支睾吸虫成虫肠支、卵黄腺、虫卵、子宫、储精囊中,可能为华支睾吸虫成虫分泌排泄抗原的组分之一。更多还原