血吸虫感染小鼠早期诊断抗原的研究

【作者】 王玠； 余传信； 张伟； 殷旭仁； 宋丽君； 钱春艳； 何伟； 柯雪丹；

【机构】 江苏省血吸虫病防治研究所；

【摘要】 目的:对6种日本血吸虫抗原的早期诊断价值进行评价,并应用二维电泳(2-DE)、免疫印渍和质谱技术鉴定可溶性日本血吸虫可溶性虫卵抗原(SEA)成分中具有早期诊断价值的抗原分子,为研制用于哨鼠早期诊断的免疫试剂提供候选抗原。方法:用日本血吸虫尾蚴感染小鼠,收集感染前及感染后不同时间的小鼠血清。采用重组日本血吸虫中国大陆株23kDa膜蛋白大亲水性肽段与谷胱甘肽的融合表达蛋白(GST-HD)、可溶性虫卵抗原(SEA)、血吸虫四跨膜蛋白第二亲水基团(TSP2HD)、血吸虫虫卵蛋白(IPSE)、日本血吸虫虫卵毛蚴抗原(SjMP-10)以及日本血吸虫信号蛋白(sj14-3-3)作为诊断抗原,运用酶联免疫方法检测感染血吸虫后不同时间的小鼠血清中特异性抗体IgM和IgG水平,观察感染后不同时间点抗原特异性抗体水平的变化及阳性率,筛选具有血吸虫感染早期诊断价值的抗原分子。采用免疫印迹法作为对照进一步验证其对血吸虫急性感染早期诊断的价值。通过对可溶性虫卵抗原成分的二维电泳免疫印渍和蛋白质质谱分析,确定SEA中具有早期诊断价值蛋白质成分。结果:随着感染时间的延长,感染小鼠血清抗各抗原抗体的阳性率逐渐增加,但在不同时间点各抗原的阳性率存在明显的差异。血吸虫感染小鼠血清抗GSH-HD、抗SEA抗体出现均较早,但抗GST-HD抗体水平上升较快,而抗SEA抗人体水平上升相对较慢。检测抗GST-HD抗体比检测抗SEA抗体更具有早期诊断价值。免疫印渍法敏感性高于酶联免疫法。抗其它抗原的抗体现较晚,水平亦较低没有早期诊断价值。免疫印迹结果显示SEA中分子量在73kDa和78kDa的蛋白条带可被感染后1周到6周小鼠血清所识别,而分子量分别为121kDa、55kDa、84kDa的蛋白条带可被感染18天后的小鼠血清所识别,反应强度随着时间推移而加强。二维电泳免疫印迹分析显示SEA中的73kDa和78kDa蛋白斑点均能被血吸虫感染后1w,2w,6w小鼠血清所识别。LC-MS/MS分析发现这2个SEA蛋白分子分别是热休克蛋白(HSP70)和葡萄糖调节蛋白(Grp78/Bip)。结论:重组GST-HD融合蛋白与SEA中的热休克蛋白(HSP70)和78kDa葡萄糖调节蛋白(Grp78/Bip)蛋白分子具有血吸虫感染早期诊断价值,免疫印迹法的灵敏性比酶联免疫吸附法高。更多还原