血红素加氧酶-1对ALI大鼠AEC-Ⅱ细胞凋亡及Bcl-2、p53的影响

【作者】 吴艳； 陈淼； 王宇辉； 刘海霞； 吴双； 王洪敏；

【机构】 贵州遵义医学院附属医院ICU； 河北唐山河北联合大学附属医院内分泌肾内科； 山东山东省微山县人民医院麻醉科；

【摘要】 目的探讨血红素加氧酶-l（heme oxygenase-1,HO-1）对过氧化氢（hygrogenperoxide,H₂O₂）所致大鼠急性肺损伤（acute lung injury,ALI）肺泡Ⅱ型上皮细胞（alveolar epithelial typeⅡcell,AEC-Ⅱ）细胞凋亡以及对凋亡蛋白Bcl-2、p53表达的影响。方法健康雄性SD大鼠20只,均予腹腔麻醉并取肺,分离纯化AEC-Ⅱ以1×106个/ml接种于培养板,原代培养24 h,将AEC-Ⅱ细胞随机分为四组:正常组,H₂O₂组,HO-1组,HO-1抑制组（锌原卟啉Ⅸ）。采用H₂O₂（0.5 mmol/L）刺激AEC-Ⅱ,复制活性氧（Reactive oxygen species,ROS）攻击损伤AEC-Ⅱ细胞的体内情况,建立ALI细胞模型;用HO-1（0.2μmol/L）或锌原卟啉Ⅸ（10μmol/L）于同时间处理2.5 h。按照Annexin V-FITC（Annexin V-FITC Apoptosis Detection Kit）细胞凋亡检测试剂盒操作,流式细胞仪检测细胞凋亡率。应用Western blot法观察凋亡蛋白Bcl-2、p53的表达。结果流式细胞仪检测:（同时间点）与正常组比较,H₂O₂组细胞凋亡率增加（P<0.05）,且随H₂O₂作用时间的延长细胞凋亡率增加;与H₂O₂组比较,HO-1组AEC-Ⅱ细胞凋亡率明显降低（P<0.05）;与HO-1组比较,HO-1抑制组细胞凋亡率增加（P<0.05）。Western blot法:与正常组比较,HO-1组Bcl-2蛋白的表达明显增强、p53蛋白的表达减弱,差异有统计学意义（P<0.05）;与HO-1组比较,H₂O₂组、HO-1抑制组Bcl-2蛋白的表达减弱而p53蛋白的表达明显增强,差异有统计学意义（P<0.05）。结论 HO-1对H₂O₂所致大鼠ALI过程中AEC-Ⅱ损伤具有保护作用,其保护作用机制与增加Bcl-2表达、抑制p53表达有关。更多还原