黄曲霉拮抗菌(GZ101)的鉴定及碱性蛋白酶基因克隆、表达

【作者】 刘付香； 李玲； 梁炫强；

【机构】 广东农业科学院作物研究所； 华南师范大学生命科学学院；

【摘要】 黄曲霉毒素（AFT）是迄今毒性最强的一类生物毒素,具有致畸、致癌和致诱变作用,对人和动物具有强烈的毒性,其中黄曲霉毒素B₁（AFB₁）更被称为第一大类致癌物,严重威胁着人类的生命健康。本文从花生种植土壤中筛选出一株黄曲霉拮抗菌GZ101,通过形态学观察并结合分子生物学分析将其鉴定为绿色木霉菌ALI210,并探究该菌的抑菌有效成分从而挖掘抗产毒相关基因。实验结果表明,GZ101菌的发酵液不仅能抑制黄曲霉菌丝的生长,还能降解黄曲霉毒素B₁（AFB₁）,降解率达85%。从发酵液中提取其总蛋白,其对黄曲霉的生长表现出抑制作用,通过阴离子交换层析、双向电泳技术挖掘出一个与抑菌相关的蛋白—碱性蛋白酶,并命名为TvALP1;采用RACE方法克隆TvALP1基因全长cDNA序列。经序列分析,该基因序列全长1233bp,编码一个由410个氨基酸组成的蛋白,其中蛋白的分子量为44.8 kDa,pI 9.03;构建pPICZαA-TvALP1真核表达载体,经诱导获得真核表达TvALP1融合蛋白。通过镍柱亲和层析后,获得纯化的44.8KD的TvALP1蛋白。体外抑制黄曲霉试验表明:纯化的TvALP1蛋白在体外能抑制黄曲霉生长、降解黄曲霉毒素B₁（AFB₁）。本文是首次对绿色木霉菌ALI210抑制黄曲霉生长及产毒进行研究,为进一步研究黄曲霉菌与绿色木霉间的互作奠定了基础,并对生产上防治黄曲霉毒素污染具有重要的指导意义。更多还原