基于EST库的葡萄(Vitis vinifera)APETALA2基因cDNA克隆及其表达分析(摘要)

【作者】 王晨； 李晓颖； 宋长年； 杨光； 房经贵； 陶建敏；

【机构】 南京农业大学园艺学院；

【摘要】 APETALA2(AP2)是拟南芥一系列调节花发育的重要基因之一,不同植物AP2的同源基因间具有较高的相对保守性,根据此特点,利用生物信息学方法以拟南芥APETALA2 cDNA序列作为模板,对葡萄EST数据库进行同源检索筛选,克隆了葡萄AP2基因的cDNA序列,并以香悦葡萄花cDNA为模板,根据以上cDNA序列设计特异引物,分别利用RACE技术和特异PCR技术获得该基因3’末端和5’末端,序列拼接后获得葡萄的APETALA2 cDNA全长,并且利用3’非翻译区(3’UTR)对Vv-AP2基因进行器官特异性表达。该基因的cDNA全长为1536bp,命名为Vv-AP2。Vv-AP2核苷酸序列有一个1536bp完整的开放读码框(ORF),5’末端非翻译区为268bp,3’末端非翻译区为376bp,其中含有28bp的Ploy~+(A)。序列分析发现,Vv-4P2除了具备完全保守的核定位信号序列(KKSR)外,还具有两个高度保守的重复序列即AP2结构域。该基因已在GenBank基因数据库注册,注册号为FJ809943。Vv-AP2的’cDNA编码了512个氨基酸,与苹果、枳、矮牵牛、拟南芥、豌豆、番茄、松树、水稻、玉米中同源基因氨基酸序列的同源性结果显示,其与双子叶植物的保守性高于单子叶植物,与松科的保守性较单子叶植物稍高(图1)。分别采用半定量RT-PCR和SYBR Green I实时定量RT-PCR方法分析Vv-AP2在葡萄叶、茎、花序、花等不.同器官中的表达水平,结果一致表明Vv-AP2在生殖器官的表达量明显高于营养器官的(图2),这与Vv-AP2在拟南芥、玉米、矮牵牛等模式植物中的表达相一致。更多还原