耐辐射奇球菌Dps-2蛋白的互作蛋白筛选

【作者】 马云； 何淑雅； 李斌元；

【机构】 南华大学药学与生命科学院；

【摘要】 背景及目的:耐辐射奇球菌(Deinococcus radiodurans,DR)是目前世界上已知最强的抗辐射生物之一,以其对于电离辐射等诸多逆境因素的超强耐受和抵抗力而著称,其抗性机理主要可归因于其特殊的物质结构和生存方式、对DNA损伤的精确高效修复以及卓有成效的抗氧化体系。Dps(DNAprotection during starvation)蛋白是DR菌抗氧化体系的重要成分。大多数细菌只表达一个Dps蛋白,而DR菌内有两种Dps蛋白。本研究以编码Dps-2的DRB0092(dps)基因作为研究对象,利用酵母双杂交系统筛选与Dps-2蛋白有相互作用的蛋白质,以期了解Dps-2蛋白可能与哪些蛋白质因子相互作用共同完成抗氧化功能。这将有助于明确DR菌高效抗氧化系统的分子机制,为DR菌辐射抗性的复杂调控网络研究提供新的资料。方法:利用基因工程方法构建诱饵载体pGBKT7-dps,经测序验证正确后,将pGBKTT-dps/pGADT7转化入酵母菌AH109中,观察其是否影响酵母宿主菌的生长以及是否具有自身相互作用、自激活性质;在本实验室前期构建好的两种DR菌基因组文库(pGADT7-DNADR/Sau3AI和pGADT7-DNADR/HpaⅡ)基础上,通过酵母双杂交技术从DR菌基因组表达文库中筛选可能与Dps-2相互作用的蛋白。结果:诱饵载体pGBKT7-dps构建成功,通过检测发现其对酵母宿主菌无毒性,该载体无自激活活性,但可发生自身相互作用;利用酵母双杂交筛选可与Dps-2蛋白发生相互作用的7个蓝色阳性克隆。结论:1.本实验成功构建了酵母双杂交系统钓饵质粒pGBKT7-dps,该质粒对于酵母菌株AH109无自激活活性:2.Dps-2蛋白具有自身相互作用,在菌体内可形成二聚体;3.利用酵母双杂交技术从耐辐射奇球菌基因组文库中筛选得到呵以与Dp-2蛋白发牛相互作用的7个相瓦作用蛋白质(肽),其中五个较有意义的互作蛋白功能集中与生物大分子的代谢、结合、降解相关。更多还原