小麦籽粒代谢蛋白不同提取方法在双向电泳中的分离效果比较研究

【作者】 王慧娜； 张卫东； 高庆荣； 高建华； 李骞骞； 姜晓丽；

【机构】 山东农业大学农学院/作物生物学国家重点实验室；

【摘要】 小麦籽粒中大量存在贮藏蛋白,探索适用于小麦籽粒代谢蛋白的提取方法,对小麦籽粒发育过程中的蛋白质组学研究具有十分重要的意义。以Rht10鲁麦15开花后第31天的籽粒为材料,采用四种不同蛋白质提取方法:TCA/丙酮法;尿素/硫脲法;酚提取法一和酚提取法二,（方法一蛋白提取液中Tris-HclpH值为8.5,主要成分为KCL,方法二中Tris-Hcl pH值为8.0,主要成分为蔗糖）,获得的蛋白进行pH4-7范围内双向电泳分离、胶体考染,通过Master^TM 2D Platinum凝胶图像分析软件分析四种提取方法得到的胶体图片,获得差异蛋白点,取具有代表性的差异蛋白,进行MALDI-TOF-MS质谱鉴定和数据库搜索比对。结果表明:四种方法都能成功的进行蛋白质的鉴定,不同方法的蛋白分离效果存在很大的差异。TCA/丙酮法获得的蛋白点484个,蛋白质在碱性端（pH7附近）堆积严重,难以分离,碱性蛋白质蛋白点少,损失过大;尿素/硫脲法获得的蛋白点489个,对高分子量蛋白分离效果比较差,存在碱性端（pH7附近）蛋白堆积情况:酚提取方法一得到的蛋白点709个,分离效果比较好,较为均匀的分布在ph4.5-7间,尤其是对低分子量蛋白,同时也存在碱性端蛋白轻微堆积情况;酚提取方法二得到的蛋白点866个,蛋白分离情况较好,蛋白点在pH4-7范围内分布均匀,重复性好。研究结果表明,针对对小麦籽粒代谢蛋白进行蛋白质组分析,酚提取方法较为适宜小麦籽粒代谢蛋白的提取,同时方法二优于方法一。更多还原