东乡野生稻RUB1基因鉴定及原核表达

【作者】 曹博洋； 罗茜； 陈发远； 王义华；

【机构】 江西农业大学理学院；

【摘要】 分布在全世界最北的东乡野生稻具有极强的耐寒能力,宿根能在最低达-12.8℃的极端低温下安然越冬,同时其还具有很强的抗病,抗干旱等抗逆境胁迫能力,分蘖能力强,是我国极其宝贵的野生稻种资源,挖掘其优质抗逆性状基因具有重大意义。本研究通过筛选东乡野生稻根的全长cDNA文库,获取了一个带有完整ORF的泛素类蛋白基因RUB1(Ubiquitin-related protein1),该基因编码了一种Ubiquitin-NEDD8-like protein RUB1类型的泛素蛋白,生物信息学分析发现RUB1cDNA存在与栽培水稻基因组中序列同源的区域,其蛋白序列与南极Deschampsia antarctica Desv中冷胁迫密切相关的DaRub1蛋白序列也高度同源(仅一个氨基酸的差异),推测其在东乡野生稻耐寒胁迫中起重要作用。构建原核表达重组质粒pET28a(+)-RUB1,转化大肠杆菌BL21,并经IPTG诱导后,SDS-PAGE电泳检测,表达蛋白分子量约为18KD,与理论蛋白大小相符,证明RUB1融合蛋白成功表达。本研究为进一步深入探讨东乡野生稻RUB1蛋白的功能和冷胁迫之间的关系奠定了基础。更多还原