红麻胞质雄性不育系与保持系总蛋白提取及双向电泳体系优化

【作者】 廖英明； 徐建堂； 祁建民； 林荔辉； 周瑞阳； 方平平； 陶爱芬；

【机构】 福建农林大学作物遗传育种与综合利用教育部重点实验室； 福建农林大学农业部东南黄红麻科学观测站； 广西大学农学院；

【摘要】 为探讨红麻胞质雄性不育的分子遗传机理,对红麻蛋白质双向电泳体系进行研究。以红麻细胞质不育系L23A和保持系L23B为开花期叶片材料,比较TCA/丙酮和酚抽提取红麻叶片总蛋白,优化上样量和样品制备方法,建立了红麻蛋白质的双向电泳技术体系和凝胶的染色方法,利用PDQuest软件分析双向电泳凝胶的相关差异蛋白。结果表明:(1)采用TCA/丙酮法比酚抽提法更适合于ISO-DALT电泳系统;(2)TCA/丙酮红麻叶片粗蛋白产量平均为31.67mg/g,是酚抽提法的1.77倍,但裂解效率为160mg/g,是酚抽提法的30%;(3)确定每根胶条最佳上样量为300μg;(4)考马斯亮蓝G-250比R-250以及银染色方法效果更佳,在17×17cm的凝胶上平均可获得708个蛋白质点。因此,本研究建立了适合于红麻胞质雄性不育系与保持系总蛋白提取方法及双向电泳体系,可为揭示红麻雄性不育机理奠定研究基础。更多还原