TGF-β1对大鼠肝星状细胞系HSC-T6增殖、细胞周期以及分泌肝纤维化相关胶原的影响

【作者】 邢欣悦； 郑素军； 王世美； 张莹； 陈煜； 余豪； 李长勇； 刘梅； 刘霜； 段钟平；

【机构】 首都医科大学附属北京佑安医院；

【摘要】 目的:观察TGF-β1对大鼠肝星状细胞系HSC-T6增殖、细胞周期以及分泌肝纤维化相关胶原的影响,并探讨其初步机制。方法:①首先筛选HSC-T6生长所能耐受的培养基中低血清浓度,MTT法检测TGF-β1对细胞增殖影响:将HSC-T6细胞分为6组,分别予TGF-β1梯度处理,终浓度依次为0,4,6,8,10,12 ng/ml,MTT法检测各组在TGF-β1处理24h,36h时的细胞增殖活性。②镜下观察细胞生长情况:HSC-T6细胞培养24h后,分别给予和不予适宜浓度的TGF-β1,在倒置显微镜下每12h观察1次细胞的生长状况。③细胞周期检:TGF-β1作用24h,36h时,分别用PI染色通过流式细胞仪检测细胞的G0/G1、S、G2/M期分布比例。④荧光定量PCR检测TGF-β1处理组与非处理组细胞中24h、36h时SMAD3、cmy-c、cdk-2、cyclinE、EGF、HGF、bcl-2、cysc、NF-κB、MMP1、MMP9、MMP14、TIMP-1、PAI-1、α-SMA、COIⅠ、COIⅢ及ebp等基因mRNA的表达变化。⑤ELISA检测TGF-β1处理组与非处理组细胞中24h、36h培养液上清中COIⅠ、COIⅢ及α-SMA的含量。结果:①HSC-T6生长所能耐受的培养基中适宜低血清浓度为0.7%,MTT结果显示,TGF-β1对HSC-T6细胞的促增殖最佳作用浓度为10ng/ml。②与未给予TGF-β1组比较,镜下细胞生长状况在TGF-β1处理24h及36h时均无明显差别。⑧流式细胞仪分析结果显示24h,36h时TGF-β1处理组细胞G0/G1期细胞比例均减少,S期细胞比例略高,但差异无统计学意义(P>0.05)。④荧光定量PCR发现,TGF-β1处理组SMAD3 mRNA、cmy-c mRNA、cdk2 mRNA、cyclin E mRNA、EGF mRNA、bcl-2 mRNA、cysc mRNA、NF-κB mRNA、TIMPl mRNA、PAI-1 mRNA、α-SMAmRNA、COIⅠmRNA及cbp mRNA在24h、36h表达均上调,HGF mRNA、MMPI mRNA、MMP9 mRNA、MMP14 mRNA及COIⅢmRNA在24h时表达下调,36h时表达上调。⑤ELISA检测发现,在24h、36h,TGF-β1处理组HSC-T6细胞COIⅠ、COIⅢ及α-SMA的分泌增加。结论:TGF-β1对大鼠肝星状细胞系HSC-T6显示了促增殖、细胞周期激活作用,并促进肝纤维化相关胶原的分泌。更多还原