【作者】 吕鸿周；

【导师】 鲍锦库；

【作者基本信息】 四川大学 ， 生物化学与分子生物学， 2006， 硕士

【摘要】 本文对玉竹凝集素(Polygonatum odoratum(Mill.)Druce lectin，POL)的研究主要包括分离纯化、性质、活性以及结构几个方面。百合科植物玉竹的根状茎经高速组织粉碎机粉碎，生理盐水浸取、硫酸铵分级沉淀透析除去硫酸铵得到玉竹凝集素粗品，将粗品过阳离子交换柱CM-Sepharose和SephacrylS-200凝胶过滤层析得到玉竹凝集素纯品。经SDS-PAGE检测为单一蛋白带，亚基分子量为14.2KD，用SephacrylS-100凝胶过滤测得其表观分子量为48KD，表明POL是由四个相同亚基组成的蛋白质。POL能凝集兔血红细胞，其凝集兔血细胞效价为3.9ug／ml。糖抑制实验结果表明，甘露聚糖是POL的凝血活性的专一性抑制糖，其它的糖类对其凝血活性的影响不明显。 POL的荧光光谱研究表明：在激发光为280nm时，其最大荧光发射峰位在328nm处，荧光光谱未见有酪氨酸(Tyr)残基的发射峰，表明Tyr残基的荧光基本上通过能量转移到Trp上，并使荧光强度增强，在激发光谱为295nm时，其最大荧光发射峰位也在328nm处，比游离Trp的最大荧光发射峰(348nm)蓝移了近20hm，说明Trp周围的极性较弱，处于疏水的微环境。研究不同温度和不同pH条件下玉竹凝集素的凝血活性和荧光光谱的变化表明，当温度达到60℃时，30分钟后其仍保留80％的凝集活性，当温度逐渐上升时，活性随着温度的升高而逐渐丧失，当温度达到100℃时，20分钟内其活性完全丧失。荧光光谱研究表明，其荧光强度随着温度的升高逐渐增强，并且最大发射波长峰位发生红移，表明该凝集素的构象发生了一定变化，即荧光基团所处微环境的极性增强。不同pH的活性研究表明，POL在Ph3—9范围内活性比较稳定，在pH5.6更多还原

【Abstract】 A lectin was isolated from the Rhizoma of polygonatum odoratum （ Mill.） Druce . The procedure involved aqueous extraction, （NH₄）₂SO₄ precipitation, dialysis to remove （NH₄）₂S0₄, ion exchange chromatography on CM-Sepharose, gel filtration on S-200. The lectin content was about 40 mg/100g dry flour . The lectin can agglutinate rabbit, and can not agglutinate human blood cells. Mannosans was the specific inhibitor of the POL hemagglutinating activity. The native molecular mass of the lectin detected by S-100 was 48kDa. And when examined by SDS-PAGE , this lectin gave a single band of 14. 2kDa in the presence of 2-mercaptoethanol. The lectin is stable up to 60°C and is stable in pH3-9.The fluorescence spectrum （FLS） of POL excited at 280nm and 295nm showed a maximum peak at 328nm. The characteristic peak of Tyr did not exist, and it showed that the fluorescence energy of Tyr was transformed to Trp and strength the fluorescence of Trp. When POL was excited at 295nm, the FLS showed a maximum peak at 328nm, the λ_? of fluorescence emission更多还原