【作者】 王晓花；

【导师】 陈琪； 范乐明；

【作者基本信息】 南京医科大学 ， 病理生理学， 2006， 硕士

【摘要】 A类清道夫受体(scavenger receptor-A，SR-A)是一种主要位于巨噬细胞表面的三聚体跨膜糖蛋白，能够识别多种配基，在宿主免疫调节、清除凋亡细胞以及动脉粥样硬化(AS)的发生发展过程中都发挥重要作用。研究表明，SR-A的胞浆域能够调节受体介导的脂质内吞、细胞黏附以及受体在细胞表面表达等过程。去除SR-A胞浆域的受体虽然可以在细胞中表达并能结合乙酰化低密度脂蛋白(AcLDL)，但不能介导AcLDL进入细胞内，细胞不能转化为泡沫细胞。因此，推测SR-A的胞浆域可能是干预泡沫细胞形成的重要靶点。本研究拟筛选与胞浆域相互作用的小分子多肽，研究这种多肽对SR-A功能的影响，以期研制出能够干预泡沫细胞形成的多肽。 在本研究中，首先将SR-A胞浆域编码序列克隆到融合表达载体PGEX-2T中，阳性克隆经IPTG诱导，表达出氨基端融合谷胱甘肽硫转移酶(GST)的SR-A胞浆域蛋白。利用亲和层析法在非变性条件下对表达的目的蛋白进行纯化。经SDS-PAGE电泳及Western blot验证，GST与SR-A胞浆域融合蛋白为可溶性表达，经纯化后目的蛋白纯度大于95％。用纯化的目的蛋白包被谷胱甘肽琼脂糖珠，淘筛噬菌体随机肽库，经过四轮“吸附-洗脱-扩增”亲和筛选，随机挑选50个噬菌体克隆，经噬菌体ELISA法检测到8个噬菌体克隆能特异性结合SR-A的胞浆域，而与GST无交叉反应。抽提阳性克隆DNA并进行序列测定，得到三种多肽序列并命名为：H5、H9、H11。将此更多还原

【Abstract】 Class A scavenger receptors (SR-A) are type II trimeric transmembrane glycoproteins mainly expressed on macrophages. A diverse group of polyanionic compounds have been identified as ligands for SR-A. The broad nature of ligand specificity in SR-A may explain receptor-multifaceted functions of macrophages such as adhesion, host defenses, apoptotic cell clearance, and atherogenesis. The cytoplasmic domain of the receptor is responsible for highly efficient internalization of the receptor-ligand complex, cells adhesion, and the receptor expression on cell surface. Our previous results have demonstrated that deletion of SR-A cytoplasmic domain has no effect on its binding to lipoprotein. However, expression of SR-A with truncated cytoplasmic domain in Chinese hamster ovary (CHO) cells did not cause lipid accumulation and foam cell formation, suggesting that the cytoplasmic domain of the receptor be an important target for therapeutic intervention of foam cell formation. In this study, we sought to identify peptides able更多还原